定量跨胎盘RNA干扰技术在模型动物建立的应用

发布时间：2017-06-02 20:19

  本文关键词：定量跨胎盘RNA干扰技术在模型动物建立的应用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 应用跨胎盘RNA干扰技术抑制胚胎鼠BMP-4基因，，为获取基因下调小鼠探索经济高效技术。2006年O’Shea发现在小鼠胚胎早期用含单基因质粒干扰可以跨过胎盘下调妊鼠靶基因引起子代鼠相关组织器官发育障碍，并产生畸形小鼠。本课题组在前期工作基础条件下申请NSFC，历时五年研究定量跨胎盘RNAi技术。其间，探索影响跨胎盘RNA干扰技术的条件并首次建立了相关技术平台；应用该技术构建先天性疾病模型动物。 方法 构建发育相关基因BMP-4下调质粒。通过尾静脉向孕鼠注射Ringer’s液、pSES质粒、pSES-SiBMP-4质粒。部分孕鼠注射48小时后取出胚胎观测胚胎发育变化，并应用RT-PCR及Western blotting检测BMP-4基因mRNA和蛋白质；部分孕鼠自然分娩后研究子代鼠生长发育变化，并用恰当的检查诊断。 结果 pSES-SiBMP-4组胚胎BMP-4基因mRNA及蛋白表达较Ringer’s组、pSES组下调（P＜0.05）。Ringer’s组、pSES组胚胎鼠发育无明显异常，pSES-SiBMP-4组胚胎鼠头部、胃肠道及脊柱发育异常。新生子代鼠中pSES-SiBMP-4组出现癫痫，肠息肉及先天性巨结肠。 结论 早期胚胎鼠跨胎盘定量RNA干扰现实可行，可建立稳定的定量跨胎盘RNA干扰技术平台。该方法可用来定量研究基因功能，构建基因下调模型动物。 （1）RNAi质粒可跨过早期胎盘调控子代基因表达，证明效果与质粒注入时间窗，质粒质量-浓度，注射速度相关。 （2）BMP-4基因对小鼠神经系统（CNSENS）、骨骼系统、循环系统、消化道和皮肤的生长发育具关键作用。 （3）qTP-RNAi可定量下调子代小鼠BMP-4基因，通过对注射条件的调控定量构建不同疾病的转基因动物模型，包括先天性癫痫、结肠息肉及先天性肠无神经节细胞症模型。
【关键词】：定量跨胎盘RNA干扰 BMP-4 小鼠动物模型 基因下调 发育
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R3411
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 总前言10-14
• 第一部分 qTP-RNAi 技术影响因素探讨及对胚胎发育影响14-34
• 前言14-15
• 1. 材料与方法15-21
• 2. 结果21-32
• 3. 讨论32-33
• 4. 结论33-34
• 第二部分 qTP-RNAi 技术构建动物模型的实验研究34-53
• 前言34-36
• 1. 材料与方法36-40
• 2. 结果40-51
• 3. 讨论51-52
• 4. 结论52-53
• 备注53-54
• 全文总结54-55
• 附图55-56
• 参考文献56-60
• 文献综述60-65
• 参考文献63-65
• 致谢65-67
• 攻读学位期间发表论文67-69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 张艳;朱进;王士奇;段文娟;丁雄辉;孙艳辉;赵占波;金鑫;王秀良;金先庆;;钙视网膜蛋白在先天性无神经节细胞症中的表达特点及临床意义[J];重庆医学;2012年33期

2 刘庆华;李杰;张文花;刘小芳;张新村;曲妮娜;;高频超声对小儿美克尔憩室的诊断价值[J];医学影像学杂志;2010年10期

3 周玲玲;姜忠强;;超声影像检查在小儿便血病因中的诊断价值[J];医学影像学杂志;2012年06期

4 卢晓潇;黄雪兰;扬欣;王薇;郑春梅;;小儿梅克尔憩室超声表现及鉴别诊断分析[J];中国临床解剖学杂志;2012年01期

5 李新民;焦玲;;小儿急性梅克尔憩室炎穿孔误诊为急性化脓性阑尾炎6例分析[J];中国误诊学杂志;2010年13期

6 徐祖才;陈恒胜;刘靓;周艳;唐波;陈国俊;王学峰;;膜片钳技术在成年大鼠海马脑片应用的初步研究[J];重庆医科大学学报;2012年09期

  本文关键词：定量跨胎盘RNA干扰技术在模型动物建立的应用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：416451