嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白的表达和纯化及其在血清学诊断中的应用

发布时间：2017-06-03 06:06

  本文关键词：嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白的表达和纯化及其在血清学诊断中的应用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的表达和纯化出嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强(MIP)蛋白,研究其在军团菌肺炎血清学诊断中应用价值。方法将已构建成功的重组质粒pET-mip转化E.coli BL21感受态细胞,诱导MIP蛋白表达,运用SDS-PAGE分析和亲和层析法纯化。用DRG军团菌IgG/IgM/IgA的ELISA检测试剂盒筛出40份阳性血清和30份阴性血清,用纯化的MIP蛋白建立间接ELISA,同时与RD的ELISA IgG、IgM、IgA试剂盒分别检测已筛选血清中的IgG、IgM、IgA抗体,然后对这两种方法进行比较,通过敏感性、特异性以及不同检测结果的一致性,来评价该方法的应用价值。结果诱导相对分子质量(Mr)大约40 000的MIP融合蛋白在E.coli BL21中表达并纯化。纯化蛋白建立的间接ELISA分别检测筛选血清中IgG、IgM、IgA抗体与国外ELISA试剂盒(RD)进行比较,IgG抗体的灵敏度88.5%,特异度95.5%,一致性Kappa值0.846(P0.05),ROC曲线下面积0.927。IgM抗体的灵敏度89.3%,特异度97.6%,一致性Kappa值0.88(P0.05),ROC曲线下面积0.947。IgA抗体的灵敏度90%,特异度95.2%,一致性Kappa值0.856(P0.05),ROC曲线下面积0.931。结论成功诱导了嗜肺军团菌MIP蛋白稳定表达并纯化,运用MIP作为包被抗原的军团菌肺炎的血清学诊断方法具有较高的诊断价值。
【作者单位】： 宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系;生育力保持省部级共建教育部重点实验室;
【关键词】： 嗜肺军团菌 巨噬细胞感染增强蛋白 蛋白表达 血清学诊断
【基金】：国家自然科学基金(30860264) 宁夏自然科学基金(NZ0992)
【分类号】：R446.1
【正文快照】： 军团病是一种急性呼吸道传染病,主要通过气溶胶传播,该病缺乏典型的症状和体征,治疗延迟或治疗方法不当病死率较高。因此特异、敏感、快速的检测方法对该病的防治非常重要。军团病确诊的“金标准”仍是培养出致病菌,但阳性率低,很难满足临床的需求[1]。PCR技术有较高的敏感性

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