铜绿假单胞菌耐药性分析及其优势抗原筛选的研究

发布时间：2017-06-03 08:18

  本文关键词：铜绿假单胞菌耐药性分析及其优势抗原筛选的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 了解天津医科大学第二医院铜绿假单胞菌分离株的标本来源和临床科室分布情况,分析铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药特征,比较不同来源分离菌株的耐药性差异,为临床合理选择抗菌药物提供依据。利用噬菌体展示十二肽库筛选能够刺激机体产生抗体的铜绿假单胞菌优势抗原表位,分析铜绿假单胞菌抗原的细胞定位,对铜绿假单胞菌抗原功能分类情况进行分析,为研究铜绿假单胞菌疫苗研究提供实验依据,进一步得到具有潜在价值的疫苗。 方法： 收集2012年8月至2013年8月天津医科大学第二医院住院及门诊患者送检标本中共分离出的铜绿假单胞菌346株,分析菌株的标本来源和临床科室分布情况,采用微量肉汤稀释法对所有菌株进行药敏试验,分析铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药情况,将菌株按分离地点住院部A座和B座分为I组和II组；按是否分离自ICU病房分为ICU组和非ICU组,分别比较各组对多种不同抗菌药物的耐药率；收集2012年3月至2012年12月天津医科大学第二医院和天津市第四医院感染铜绿假单胞菌7-10天的患者血清28份,收集天津医科大学第二医院入院体检者中健康成人血清30份,应用噬菌体展示十二肽库进行1轮阴性选择淘选和3轮生物淘选,通过ELISA方法选择阳性克隆噬菌体,对阳性单克隆噬菌体进行测序,与PAO1基因组序列比对,分析铜绿假单胞菌抗原的细胞定位和功能分类情况。 结果： 1.346株铜绿假单胞菌半数以上分离自痰液标本,其次为尿液和分泌物,分别占19.7%和6.6%,血液和其它标本所占比例较小,分别为2.0%和6.6%。346株铜绿假单胞菌主要分布在中西医科(35株,占10.1%)、泌尿外科(34株,占9.8%)、老干部科(32株,占9.2%)、ICU(31株,占9.0%)、儿科(31株,占9.0%)、感染科(30株,占8.7%)和呼吸科(29株,占8.4%),其它科室如外科、神经外科、心脏内科、肾内科、心脏外科、新生儿科、神经内科等(比例在3%-5%)较少,散在分布。 2.铜绿假单胞菌对哌拉西林的耐药率最高,接近30%,其次为头孢哌酮、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南、替卡西林/克拉维酸、庆大霉素和哌拉西林/他唑巴坦,耐药率在15%～25%之间,其他药物的耐药率均在15%以下。 3.自住院部A座分离的铜绿假单胞菌对头孢吡肟的耐药率较住院部B座高,自ICU病房分离的铜绿假单胞菌与非ICU病房耐药率无差别。 4.经过3轮生物淘选后,产出/投入由2.8×10-7增至5.7×10-5,优势抗原表位噬菌体得到了明显富集。经ELISA方法选择得到30个阳性克隆单噬菌体,测序后得到12种序列。与PAO1基因组序列比对,得到673个蛋白,细胞定位分别为胞浆、内膜、浆周、外膜、胞外和未知,所占比例分别为49.3%、21.8%、5.9%、6.1%、1.5%和15.3%。所得蛋白按功能分为26类,各部位的蛋白与细胞功能一致。出现频率较高的基因为：pvdD、PA0758、phzFl。胞外和外膜蛋白为铜绿假单胞菌优势抗原。 结论： 本院铜绿假单胞菌主要分离自痰液标本,其次为尿液。临床分布科室主要是中西医科和泌尿外科。铜绿假单胞菌对哌拉西林耐药率最高。自住院部A座分离PA对头孢吡肟的耐药率较住院部B座高,自ICU病房分离的PA与非ICU病房耐药率无差别。胞外和外膜蛋白为铜绿假单胞菌优势抗原,外膜孔蛋白OprE,脂蛋白YfiB,胞外多糖Pel及“分泌因子”类中的假单胞菌素可考虑用于今后疫苗研究。
【关键词】：假单胞菌 铜绿 耐药 抗原 基因 疫苗 噬菌体展示十二肽库
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R378.991
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 符号说明11-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、铜绿假单胞菌临床分布及药敏分析15-25
• 1.1 材料与方法15-17
• 1.1.1 材料15-16
• 1.1.2 方法16-17
• 1.2 结果17-22
• 1.2.1 临床分布17-18
• 1.2.2 药敏结果18-22
• 1.3 讨论22-24
• 1.4 小结24-25
• 二、铜绿假单胞菌优势抗原筛选的研究25-40
• 2.1 材料和方法25-30
• 2.1.1 材料25-27
• 2.1.2 方法27-30
• 2.2 结果30-37
• 2.2.1 噬菌体展示随机12肽库亲和筛选30-31
• 2.2.2 阳性克隆噬菌体DNA序列分析31
• 2.2.3 阳性克隆噬菌体插入序列与PAO1基因组比对31-34
• 2.2.4 细胞定位和功能分类34-37
• 2.3 讨论37-39
• 2.4 小结39-40
• 结论40-41
• 参考文献41-46
• 发表论文和参加科研情况说明46-47
• 综述47-57
• 综述参考文献54-57
• 致谢57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李静;蔡木发;崔国辉;;123株铜绿假单胞菌感染分布及耐药性分析[J];海南医学;2012年06期

2 赵羽;夏梦岩;邹永红;孙欣;牛菊茹;;156株铜绿假单胞菌感染分布及耐药性分析[J];解放军医药杂志;2011年02期

3 赵红蕾;刁昱文;冯新;高宇;刘珊珊;顾敬敏;雷连成;韩文瑜;;噬菌体展示肽库技术及其在分子病原细菌学研究中的应用[J];河北科技师范学院学报;2011年01期

4 汪复;朱德妹;胡付品;阮斐怡;倪语星;孙景勇;徐英春;张小江;胡云健;艾效曼;俞云松;杨青;孙自镛;李丽;贾蓓;黄文祥;卓超;苏丹虹;魏莲花;吴玲;张朝霞;季萍;王传清;薛建昌;张泓;李万华;徐元宏;沈继录;单斌;杜艳;;2009年中国CHINET细菌耐药性监测[J];中国感染与化疗杂志;2010年05期

5 张yN博;倪语星;孙景勇;朱德妹;胡付品;汪复;蒋晓飞;俞云松;杨青;孙自镛;简翠;徐英春;孙宏莉;胡云建;艾效曼;单斌;杜艳;苏丹虹;卓超;徐元宏;沈继录;王传清;王爱敏;贾蓓;黄文祥;魏莲花;吴玲;张朝霞;季萍;张泓;李万华;;2009年中国CHINET铜绿假单胞菌细菌耐药性监测[J];中国感染与化疗杂志;2010年06期

6 茅庆云;赵波;李飞;;156株铜绿假单胞菌分布及耐药性分析[J];检验医学与临床;2012年14期

7 施晓群;孙景勇;倪语星;汪复;朱德妹;胡付品;蒋晓飞;徐英春;张小江;胡云建;艾效曼;杨青;孙自镛;陈中举;贾蓓;黄文祥;卓超;苏丹虹;魏莲花;吴玲;张朝霞;季萍;王传清;王爱敏;张泓;孔菁;徐元宏;沈继录;单斌;杜艳;俞云松;林洁;;2011年中国CHINET铜绿假单胞菌耐药性监测[J];中国感染与化疗杂志;2013年03期

8 潘琴;石磊;潘雪刁;巫玮;金桂芳;臧林泉;;肺癌细胞特异性结合肽的体内筛选及初步鉴定[J];山东医药;2008年33期

9 杨玉杰;董兰景;武入英;张娅;王群;;多耐药铜绿假单胞菌感染临床分布与耐药性趋势分析[J];山西医药杂志(下半月刊);2012年11期

10 李晓松;张学军;闫华辉;孙艳艳;;596株铜绿假单胞菌临床分布特点及耐药性分析[J];中国生化药物杂志;2012年06期

  本文关键词：铜绿假单胞菌耐药性分析及其优势抗原筛选的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：417642