Cpn0147基因真核表达载体的构建及在HeLa细胞中的表达

发布时间：2017-06-04 01:03

  本文关键词：Cpn0147基因真核表达载体的构建及在HeLa细胞中的表达，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的构建肺炎衣原体Cpn 0147基因真核表达重组质粒,为进一步研究其与宿主相互作用的分子机制打下基础。方法以Cpn AR39株基因组为模板,以Cpn0147全长编码特异性引物进行PCR扩增;将Cpn0147基因插入至pcDNA3.1+/His/Myc载体,构建pcDNA3.1+/His/Myc-Cpn0147重组质粒,经双酶切及测序鉴定后转染至HeLa细胞中,采用RT-PCR检测重组质粒转染情况,采用免疫荧光法及Western blot检测Cpn0147蛋白在细胞中的表达。试验设pcDNA3.1+/His/Myc载体为阴性对照。结果从CpnAR39株基因组DNA中扩增出Cpn0147基因片段,大小466bp,经双酶切、连接、转化、筛选,得到pcDNA3.1+/His/Myc-Cpn0147重组质粒,序列测定证实与GenBank Cpn AR39株Cpn0147基因序列一致;RT-PCR扩增出Cpn0147基因,与理论大小一致;免疫荧光检测重组质粒转染后HeLa细胞胞浆观察到红色荧光,对照组无荧光;Western blot检测到特异反应条带位于16kd,对照组无此条带。结论成功构建pcDNA3.1+/His/Myc-Cpn0147重组质粒并在真核细胞内表达Cpn0147蛋白,为进一步研究其分子生物学功能奠定了基础。
【作者单位】： 河北北方学院病原生物学与免疫学研究所临床检验诊断学重点实验室;
【关键词】： 肺炎衣原体 Cpn 真核载体 间接免疫荧光 免疫沉淀
【基金】：河北省自然科学基金项目(No.C2014405041)
【分类号】：R374
【正文快照】： ***foundation for further study of the biological function of Cpn0147.衣原体(Chlamydia)是一类严格活细胞内寄生、具有独特二相发育周期的病原生物,肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)与沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)是衣原体属中引起人类疾病的主要病原体[1

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 代国知;马忠夏;周安文;陈虹亮;吴移谋;;肺炎嗜衣原体Cpn0147重组蛋白的免疫学活性研究[J];国际检验医学杂志;2012年14期

2 童伟;周淑芬;贾天军;;肺炎衣原体感染儿童血清中抗Cpn0147抗体的检测[J];临床检验杂志;2012年04期

3 粟盛梅;李忠玉;黄秋林;钟光明;周洲;陆春雪;;沙眼衣原体pORF8质粒蛋白的表达及其单克隆抗体的制备与鉴定[J];中国病原生物学杂志;2013年02期

【共引文献】

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 田颖新;酵母双杂交技术筛选Cpn0147和Cpn0308配体的研究[D];河北北方学院;2013年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 李忠玉;吴移谋;黄秋林;汪世平;钟光明;;CT358蛋白在沙眼衣原体感染细胞中的定位及特性分析(英文)[J];生物化学与生物物理进展;2009年05期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘钢,王树欣,杨新吉,胡翼云,江载芳,杨永弘;肺炎衣原体转运、储存及传代条件的探讨[J];中华微生物学和免疫学杂志;2001年03期

2 俞信忠,王卓英,吴满武,许平,曾艳,郑淑芳;335例儿童肺炎衣原体急性下呼吸道感染分析[J];中华医院感染学杂志;2004年11期

3 张阳根;张海艳;;肺炎衣原体研究进展[J];实验与检验医学;2008年05期

4 龙宝光;;经培养证实的肺炎衣原体所致肺炎[J];国外医学.流行病学传染病学分册;1992年03期

5 Marrie T J ,李海潮;肺炎衣原体[J];国外医学.呼吸系统分册;1993年03期

6 罗宪玲;汪玎妍;蒋文玲;陈泽波;;套式PCR检测新生儿肺炎衣原体[J];广东医学;1996年03期

7 苏明权,穆士杰,马越云,于文彬,丁振若;聚合酶链反应检测肺炎衣原体方法的建立与初步应用[J];中华医学检验杂志;1997年04期

8 刘钢,杨永弘,江载芳;肺炎衣原体研究现状[J];中华儿科杂志;2001年08期

9 王亚娟,沈叙庄,佟月娟,姚德秀,燕润菊,王春莲,幺远,刘钢,Mikka Paldanius,Maija Leinonen,Heikki Peltola,杨永弘;肺炎衣原体在儿童急性下呼吸道感染中的情况[J];中华儿科杂志;2001年09期

10 张湘燕;肺炎衣原体与呼吸道感染性疾病[J];贵州医药;2002年09期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 刘卉;;肺炎衣原体与脑梗死关系的研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年

2 陆小梅;;肺炎衣原体血清学检测及临床价值[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年

3 储德节;胡志雄;余竹元;都勇;郭水根;潘春峰;王静;周海英;;建立动物模型探讨肺炎衣原体致肺癌作用的研究[A];中华医学会呼吸病学年会——2011（第十二次全国呼吸病学学术会议）论文汇编[C];2011年

4 秦玲;;肺炎衣原体套式PCR检测及其临床意义(摘要)[A];中华医学会第六届全国结核病学术大会论文汇编[C];2000年

5 倪安平;崔京涛;汪晓巍;;4种国产大环内酯类抗菌药物体外抗沙眼衣原体和肺炎衣原体作用的研究[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

6 糜祖煌;秦玲;;肺炎衣原体套式PCR检测及其临床意义[A];第五届全国优生科学大会论文汇编[C];2000年

7 苏世斌;林勤益;郭浩然;;台湾成年人肺炎衣原体和新陈代谢症候群之相关研究[A];第七届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2009年

8 杨玲;吴移谋;周洲;邓仲良;刘R

本文编号：419606