抗CD20单链抗体融合显性抗原肽的原核表达和其抑瘤活性研究

发布时间：2017-06-04 16:06

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【摘要】：目的:人工设计并表达美罗华(C2B8)单链可变区抗体与李斯特菌溶细胞素O(Listeriolysin O,LLO)显性抗原表位构成的重组融合蛋白(Sc Fv-p LLO),初步分析其抗淋巴瘤细胞活性。方法:查询数据库获得美罗华(C2B8)单抗VH和VL基因序列,构建抗CD20单链抗体(Sc Fv)基因序列,选取LLO的2个CD4+T细胞表位,构建单链抗体融合抗原表位的重组蛋白基因序列,克隆至原核表达载体,经诱导表达纯化,流式细胞术和免疫共沉淀分析其与淋巴瘤细胞结合能力,细胞增殖实验测定其对淋巴瘤细胞生长的影响,凋亡实验分析其诱导淋巴瘤细胞凋亡的能力,淋巴细胞增殖实验分析其免疫原性。结果:成功诱导表达重组蛋白Sc Fv-p LLO。Sc Fv-p LLO可不同程度地靶向结合不同淋巴瘤细胞系,并明显抑制Raji细胞生长和诱导其凋亡。Sc Fv-p LLO可刺激免疫小鼠脾细胞增殖。结论:重组蛋白Sc Fv-p LLO保留了Sc Fv的功能,可靶向结合和抑制CD20阳性淋巴瘤细胞的生长,同时可激活机体免疫应答,为进一步研究其模拟瘤细胞表面抗原和作为瘤细胞疫苗佐剂的功能奠定基础。
【作者单位】： 中国医学科学院基础医学研究所;北京协和医学院基础学院病理学系和细胞资源中心;
【关键词】： CD 单链抗体 B细胞淋巴瘤 抗原表位 李斯特菌溶细胞素O
【基金】：国家科技部科技基础基金资助项目(NSTI-CR14)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 目前肿瘤靶向治疗在基础研究和临床实践方面均取得显著发展,其中单克隆抗体逐渐成为肿瘤靶向治疗的主力军。B细胞淋巴瘤是一种血液系统疾病,采用传统治疗手段临床疗效较差。随着对CD20分子结构特点的认识,抗CD20单克隆抗体的设计开发在B细胞淋巴瘤的临床治疗中取得重要进展。

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