D-半乳糖致小鼠衰老模型剂量和给药方式探讨

发布时间：2017-06-06 09:04

  本文关键词：D-半乳糖致小鼠衰老模型剂量和给药方式探讨，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的观察不同的注射方式和D-半乳糖给药剂量对小鼠的影响,探讨构建D-gal氧化损伤衰老小鼠模型的方法。 方法SPF级雄性昆明小鼠200只,体重22±4g,适应性喂养9天后按体重随机分为10组,每组20只。其中5组经颈背部皮下注射(s.c.)给予D-半乳糖(D-gal),分别为100、125、150、200mg/(kg·d)四个剂量组和生理盐水(N.S.)对照组；另外5组经腹腔注射(i.p.)给予上述四个剂量的D-gal和N.S.。各组小鼠按相应剂量连续注射60天,以0.1ml/10g体重(Body weigh, BW)容积给药,每天称重一次,按给药前体重调整给药容积。所有小鼠每天给予常规饲料,自由饮水、摄食。称取末次体重、采血后处死动物,取材进行生化、常规病理检测,观察体重、胸腺指数、脾脏指数、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、单胺氧化酶(MAO)、过氧化氢酶(CAT)、脂褐素(LP)变化,同时光学显微镜观察肝、脑组织形态学改变。 结果 (1) s.c.D-gal组终末体重、胸腺指数、脾脏指数均小于其对照组,其中200mg/(kg·d)剂量组胸腺指数、脾脏指数分别与其对照组比较差异有统计学意义(P0.05)；i.p.D-gal组体重、胸腺指数、脾脏指数均小于其对照组,其中150和200mg/(kg·d)剂量组体重与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05),200mg/(kg·d)剂量组脾脏指数与其对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。 (2) s.c.D-gal组血清SOD活性均低于其对照组,MDA含量均高于其对照组,其中200mg/(kg·d)剂量组SOD活性、MDA含量分别与其对照组比较差异均有有统计学意义(P0.05)；i.p.D-gal组血清SOD活性低于其对照组,MDA含量均高于其对照组,其中200mg/(kg·d)剂量组SOD活性、MDA含量分别与其对照组比较差异有统计学意义(P0.05)；且150和200mg/(kg·d)剂量下,s.c.与i.p.组比较差异均有统计学意义(P0.05)。 (3) s.c.D-gal组肝组织MDA含量均高于其对照组,GSH含量、SOD活性均低于其对照组,组间比较差异无统计学意义; i.p.D-gal组肝组织MDA含量均高于其对照组,GSH含量、SOD活性均低于其对照组,组间比较差异无统计学意义。 (4) s.c.D-gal组脑组织LP含量、MAO活性均高于其对照组,CAT活性均低于其对照组,其中200mg/(kg·d)剂量组CAT活性分别与100mg/(kg·d)剂量组、对照组比较差异有统计学意义(P0.05),200mg/(kg·d)剂量组LP含量分别与100、125、150mg/(kg·d),对照组比较差异有统计学意义(P0.05)；i.p.D-gal组脑组织LP含量、MAO活性均高于其对照组,CAT活性均低于其对照组,其中200mg/(kg·d)剂量组CAT活性显著升高(P0.05),200mg/(kg·d)剂量组LP含量与100mg/(kg·d)、对照组比较差异有统计学意义(P0.05)；且100mg/(kg·d)剂量下s.c.与i.p.组比较差异有统计学意义(P0.05)。 (5)肝组织形态学变化：与其对照组相比,100mg/(kg·d)D-gal组均可见小鼠肝小叶结构紊乱,肝实质细胞数目未见明显减少,肝细胞体积增大,轻微的水样变性和脂肪变性,汇管区纤维组织增生,胆管上皮轻度增生。上述形态学改变随D-gal浓度的递增而加重,200mg/(kg·d)可见明细水样变性,有的呈气球样变。同一剂量下s.c.组肝形态学改变略轻于i.p.组。 (6)脑组织形态学变化：s.c.、i.p.组分别与其对照组相比,海马区出现不同程度的神经元缺失、排列疏松、神经元肿胀变性、核固缩现象。同一剂量下D-gal i.p.组海马CA1区上述形态学改变要比D-gal s.c.组明显。特别是150、200mg/(kg·d)i.p.剂量组小鼠脑海马组织CA1区形态学改变较对应s.c.组明显,核固缩严重。 结论 本实验条件下,根据以上结果,初步结论如下： 1.150-200mg/kg D-gal可能较适合建立小鼠衰老模型。 2.i.p.比s.c.较容易建立衰老模型。 3.100-200mg/kg D-gal诱导小鼠海马损伤可能会比小于100mg/kg更严重。
【关键词】：皮下注射 腹腔注射 D-半乳糖 小鼠 衰老模型
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R-332
【目录】：

• 主要英文缩略词5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-15
• 1 材料与方法15-25
• 1.1 主要试剂与仪15-16
• 1.1.1 主要试剂15
• 1.1.2 主要仪器15-16
• 1.2 实验动物及饲养条件16-17
• 1.3 实验动物处理17-19
• 1.3.1 动物分组、建模17-18
• 1.3.1.1 D-gal溶液的配制17
• 1.3.1.2 实验分组和设计17-18
• 1.3.2 样本采集与处理18-19
• 1.3.2.1 肝脑病理切片制作18
• 1.3.2.2 生化指标测定取材18-19
• 1.4 指标测定19-25
• 1.4.1 体重测定19
• 1.4.2 胸腺指数、脾脏指数测定19
• 1.4.3 血清MDA含量、SOD活性测定19-20
• 1.4.3.1 血清的制备19
• 1.4.3.2 血清MDA含量测定19
• 1.4.3.3 血清SOD活性测定19
• 1.4.3.4 结果表示19-20
• 1.4.4 肝总蛋白、MDA、GSH含量和SOD活性测定20-21
• 1.4.4.1 肝匀浆液的制备20
• 1.4.4.2 肝上清液的制备20
• 1.4.4.3 肝总蛋白含量测定20
• 1.4.4.4 肝MDA含量测定20
• 1.4.4.5 肝GSH含量测定20
• 1.4.4.6 肝SOD活性测定20-21
• 1.4.4.7 结果表示21
• 1.4.5 脑总蛋白、LP含量和CAT、MAO活性测定21-23
• 1.4.5.1 脑匀浆液的制备21
• 1.4.5.2 脑上清液的制备21
• 1.4.5.3 脑水相液的制备21
• 1.4.5.4 硫酸奎宁荧光标准液的配制21
• 1.4.5.5 脑总蛋白含量测定21-22
• 1.4.5.6 LP含量测定22
• 1.4.5.7 脑CAT活性测定22-23
• 1.4.5.8 脑MAO活性测定23
• 1.4.5.9 结果表示23
• 1.4.6 肝、脑形态学改变23-25
• 1.4.6.1 主要试剂的配制23
• 1.4.6.2 肝脑病理切片的制作过程23-25
• 2 统计学处理25
• 3 结果25-39
• 3.1 皮下和腹腔注射D-gal衰老模型小鼠生长发育分析25-29
• 3.1.1 小鼠一般表现25
• 3.1.2 小鼠体重增长情况25-28
• 3.1.2.1 s.c.D-gal对小鼠体重的影响25-26
• 3.1.2.2 i.p.D-gal对小鼠体重的影响26-27
• 3.1.2.3 实验终末,同D-gal剂量下s.c.和i.p.对小鼠体重的影响27-28
• 3.1.3 D-gal剂量和注射方式对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响28-29
• 3.2 皮下和腹腔注射D-半乳糖衰老模型小鼠某些生化指标分析29-36
• 3.2.1 D-gal剂量和注射方式对MDA含量的影响29-30
• 3.2.2 D-gal剂量和注射方式对SOD活性的影响30-32
• 3.2.3 D-gal剂量和注射方式对小鼠肝GSH含量的影响32-33
• 3.2.4 D-gal剂量和注射方式对小鼠脑LP含量的影响33-34
• 3.2.5 D-gal剂量和注射方式对小鼠脑组织CAT活性的影响34-35
• 3.2.6 D-gal剂量和注射方式对小鼠脑组织MAO活性的影响35-36
• 3.3 D-半乳糖衰老小鼠模型肝脑形态学改变描述性分析36-39
• 4 讨论39-48
• 4.1 各组小鼠体重的观察39-40
• 4.2 各组小鼠胸腺、脾脏指数的观察40
• 4.3 各组小鼠氧化损伤、抗氧化能力的观察40-45
• 4.4 形态学改变的观察45-48
• 5 结论48-49
• 参考文献49-56
• 附录56-58
• 文献综述58-76
• 参考文献69-76
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录76-77
• 致谢77

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