人精子甘露糖受体的分子定性研究

发布时间：2017-06-07 12:00

  本文关键词：人精子甘露糖受体的分子定性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：利用不同方法判断人精子甘露糖受体（hsMR）的存在，并通过亲和层析技术分离纯化该受体，同时探讨其与血清淀粉样蛋白P成分（SAP）、HSP70家族分子（HSP70、HSPA2、HSC70），以及人巨噬细胞甘露糖受体（CD206）的关系，旨在明确该受体分子特性，为进一步研究其在人类受精中的作用奠定基础。 方法：收集正常人精子，提取人精子全蛋白；以DMA为探针，进行Dot-Blot和Western Blot实验，并用DMA-FITC标记结合人精子蛋白后的甘露糖-琼脂糖凝胶颗粒（mannose-Sepharose4B）（简称DM-beads，以下同）；利用亲和层析技术分离纯化人精子甘露糖受体；分别用DMA-FITC以及SAP、HSP70、HSPA2、HSC70和CD206的抗体为探针标记结合人精子蛋白后的DM-beads，并用DMA-FITC以及SAP、HSP70、HSPA2、HSC70的抗体在不同状态人精子进行原位荧光标记。 结果：Dot-Blot和Western Blot以及DMA-FITC标记结合人精子蛋白后的DM-beads结果均显示人精子蛋白中存在hsMR能与DMA特异性结合；WesternBlot结果显示获能人精子蛋白中hsMR分子量约为72KDa。亲和层析柱填料电泳银染出现多条细密条带，提示人精子中不止一种蛋白质分子能与甘露糖结合。不同探针标记结合洗涤去精浆人精子蛋白、获能人精子蛋白合后的DM-beads显示，人精子蛋白中存在HSP70、HSPA2和HSC70，且均具有DM结合活性.此外，anti-SAP标记结合洗涤去精浆人精子蛋白后DM-beads出现绿色荧光，而结合获能人精子蛋白后DM-beads几乎未见绿色荧光，表明SAP存在于洗涤去精浆精子蛋白中，获能人精子蛋白中SAP标记阴性；anti-CD206-Biotin标记结合人精子蛋白后DM-beads均未见有特异性荧光出现，表明人精子蛋白中不存在CD206分子。不同探针标记不同状态人精子显示，SAP存在于新鲜洗涤人精子表面，定位于尾部；HSP70主要见于顶体反应后人精子颈-中段；HSPA2在获能人精子颈-中段可见，在顶体反应后精子多见于赤道段和顶体后区，可见典型bar状结构，颈段隐约可见；HSC70主要见于赤道段和顶体后区，可见典型bar状结构，颈段隐约可见，偶见全头部表达。 结论：人精子甘露糖受体（hsMR）是人精子中具有甘露糖结合活性的蛋白质，至少包含两类分子：（1）血清淀粉样蛋白P成分（SAP）；（2）热休克蛋白70家族分子（HSP70、HSPA2和HSC70）。分布于人射出精液中的精子尾部的hsMR，主要成分是SAP。在精子获能过程中SAP被去除，因此判断其为精子尾的表在蛋白；分布于人精子头部至精子尾中段的hsMR，主要成分是热休克蛋白70家族分子（HSP70、HSPA2和HSC70）。其中，HSP70主要分布于顶体反应后精子的颈-中段；HSPA2主要分布于获能精子颈-中段和顶体反应后精子头赤道段及（或）顶体后区；HSC70主要分布于顶体反应后精子头的赤道段及或顶体后区，提示HSPA2和HSC70可能在受精中有重要作用。人精子中不存在CD206蛋白（人巨噬细胞甘露糖受体，hmMR），证明hsMR虽然与hmMR一样具有甘露糖结合活性，但两者不是同一种分子。本研究关于hsMR与HSP70家族分子关系的发现国际上尚未见报道。
【关键词】：人精子 甘露糖受体 SAP HSP70家族分子 CD206
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R321.1
【目录】：

• 英文缩略词表4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-13
• 第Ⅰ部分 人精子蛋白提取及粗提蛋白中 hsMR 的检测13-31
• 实验 1 人精子蛋白粗提及 hsMR 的检测13-25
• 实验 2 hsMR 结合活性的 DM-beads 实验25-29
• 讨论29-31
• 第Ⅱ部分 亲和层析法分离纯化人精子甘露糖受体31-35
• 第Ⅲ部分 人精子中 hsMR 与 HSP70 家族分子、SAP 及 CD206 的关系探讨35-59
• 实验 1 hsMR 与相关候选分子的 DM-beads 交叉标记实验35-49
• 实验 2 hsMR 及相关候选分子在不同状态人精子的原位荧光标记49-59
• 结论59-60
• 参考文献60-64
• 综述 人精子甘露糖受体的研究进展及展望64-73
• 参考文献68-73
• 致谢73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 江澍;林典梁;江一平;;抗人精子甘露糖受体抗血清对精子穿透实验的影响[J];解剖学报;2007年06期

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 张艳;人精子甘露糖受体不同探针标记的比较研究[D];福建医科大学;2011年

2 林典梁;人精子甘露糖受体纯化及其对受精能力的影响[D];福建医科大学;2002年

3 江澍;人精子甘露糖受体对精卵融合的影响[D];福建医科大学;2002年

4 刘志春;人精子甘露糖受体的纯化及其肽质量指纹谱鉴定[D];福建医科大学;2008年

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本文编号：428938