畸形表皮自调节因子1相关功能蛋白的筛选

发布时间：2017-06-07 16:18

  本文关键词：畸形表皮自调节因子1相关功能蛋白的筛选，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的获得畸形表皮自调节因子1(DEAF1)稳定高表达的HEK293T细胞株,通过免疫共沉淀(Co-IP)和质谱分析技术筛选能与DEAF1相互作用的蛋白质因子。方法用Turbo Fect转染试剂将p EGFP-m DEAF1和p EGFP-N1质粒分别转染HEK293T细胞和2F-2B细胞、荧光显微镜观察DEAF1在2种细胞中的定位。将质粒p3×FLAG-m DEAF1分别转染HEK293T和2F-2B细胞株,同时设置相应未转染的空白对照组;通过反转录PCR法和实时定量PCR(qRT-PCR)检测DEAF1在2种细胞中mRNA表达水平,通过Western blot法检测DEAF1在2种细胞中蛋白表达水平。p3×FLAG-m DEAF1质粒转染HEK293T细胞,G418筛选阳性克隆,Western blot法、免疫荧光染色和流式细胞术鉴定DEAF1稳定表达的HEK293T-DEAF1细胞株。抽提HEK293T-DEAF1细胞和正常HEK293T细胞的核蛋白,用EZviewTMRed ANTI-FLAG M2亲和珠子进行Co-IP,SDS-PAGE分离,挑选明显富集和对照泳道没有的条带进行质谱分析,明确DEAF1的相关功能蛋白。结果荧光显微镜下可见DEAF1定位于细胞核;反转录PCR、qRT-PCR检测发现转染组DEAF1的mRNA表达水平明显高于未转染组;Western blot法检测发现转染组有融合蛋白m DEAF1-FLAG表达,成功获得稳定高表达DEAF1的HEK293T-DEAF1细胞。经Co-IP筛选和质谱分析,得到一些DEAF1的相关功能蛋白,如前mRNA处理所需的因子及酶,参与起始后RNA聚合酶,参与肽键断裂、蛋白空间结构形成的分子和其他转录因子等。结论成功获得稳定高表达DEAF1的HEK293T-DEAF1细胞,经Co-IP筛选和质谱分析获得了一些DEAF1相关的功能蛋白。
【作者单位】： 三峡大学医学院;湖北省荆门市第二人民医院心血管内科;
【关键词】： DEAF 稳定表达 免疫共沉淀 质谱分析 筛选
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81172788)
【分类号】：R392
【正文快照】： 外周淋巴器官中,诱导外周免疫耐受是通过多种外周组织特异抗原的异位表达而实现的[1]。在小鼠胰淋巴结基质细胞中有一系列外周组织抗原(peripheral tissue antigens,PTA)基因的表达,且PTA基因的表达受转录因子畸形表皮自调节因子1(deformed epidermal autoregulatory factor-1

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 朱小慧;盛德乔;;免疫耐受机制的研究进展[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年05期

2 盛德乔;;小鼠DEAF1调控基因的生物信息学分析[J];生物信息学;2011年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 朱勇;施舜缤;沈振亚;;巨噬细胞在混合嵌合体诱导异种免疫耐受中作用的实验研究[J];中国医药科学;2013年18期

2 陈方如;郝飞;;泛素连接酶Pellino1蛋白研究进展[J];免疫学杂志;2015年07期

3 朱小慧;盛德乔;康乐;伍仙凤;邵文;刘晓艳;;小鼠DEAF1多克隆抗体的制备及应用[J];生物技术通报;2014年05期

4 滕牧洲;马文丽;;走近医学研究领域中的基因芯片技术[J];分子诊断与治疗杂志;2014年06期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 刘志刚;脊髓缺血再灌注损伤大鼠miRNA表达谱的筛选与初步分析[D];吉林大学;2015年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前8条

1 郑婕;董韬;冯永君;;兼职功能蛋白[J];中国生物化学与分子生物学报;2010年07期

2 石如玲;赵朝贤;朱海暴;杨原;王素玲;姜玲玲;;大鼠胆汁酸合成加强时肝D-双功能蛋白mRNA表达及活性升高[J];基础医学与临床;2006年07期

3 于珊;王华岩;;肌肉生长抑制因子对肌细胞发育的调控研究[J];中国实验动物学报;2008年06期

4 张雪梅;植物成为疫苗和功能蛋白的新资源[J];生物技术通讯;1996年03期

5 李星潘;梁韶晖;;蚊唾液腺功能蛋白研究进展[J];热带医学杂志;2013年11期

6 石如玲,赵朝贤,朱海暴,杨原,王素玲,姜玲玲;大鼠肝脏D-双功能蛋白活性增加与胆汁酸合成的关系[J];中国医学科学院学报;2005年03期

7 王素玲;王切;姜玲玲;;胆汁酸合成增加与肝D-双功能蛋白表达增强、活性升高的相关性[J];第四军医大学学报;2008年06期

8 ;[J];;年期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 王彬;党永强;李洪伟;李磊;吴玉清;;拟肽类荧光离子探针的设计合成及识别机理揭示[A];第十五届全国光散射学术会议论文摘要集[C];2009年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 记者 常丽君;果蝇蛋白与功能蛋白编织成天然纤维[N];科技日报;2011年

2 记者 耿挺;神经元里有个“高速公路收费站”[N];上海科技报;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 石如玲;大鼠肝脏D-双功能蛋白与胆汁酸代谢关系的研究[D];河北医科大学;2004年

2 张志荣;丙烯酰胺致周围神经损伤修复中雪旺细胞功能蛋白的作用研究[D];中国疾病预防控制中心;2011年

  本文关键词：畸形表皮自调节因子1相关功能蛋白的筛选，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：429627