人外分泌汗腺细胞分离方法的优化
本文关键词：人外分泌汗腺细胞分离方法的优化，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的:优化人外分泌汗腺细胞的分离方法,以高效地提取外分泌汗腺细胞。方法:新鲜的皮肤样本剪成组织微粒(大小约1 mm3),A组采用胰蛋白酶-乙二胺四乙酸(EDTA)和胶原酶Ⅱ型(2 mg/ml)体积分数1∶1混合的方法;B组采用传统消化方法,即胶原酶Ⅱ型;C组采用胰蛋白酶-EDTA消化的方法,三组同时置于恒温培养箱内,比较三种方法处理后汗腺细胞团的获取情况。将挑取的汗腺细胞团种于培养皿内,观察细胞贴壁和生长情况,并用流式细胞仪测定各组细胞的增殖指数,最后进行免疫细胞化学检测汗腺细胞标志性蛋白的表达。结果:A组和C组在消化30 min后,镜下可见少部分的汗腺细胞团,2 h后A组游离汗腺细胞团明显增多,C组游离汗腺细胞团很少;B组在消化6 h后,才出现部分游离的汗腺细胞团。将汗腺细胞团培养3 d后发现C组汗腺细胞贴壁情况差、成活细胞少;A组和B组的汗腺细胞贴壁情况良好,培养9 d后呈"铺路石样"生长,细胞增殖指数分别为(18±4)%和(17±6)%,无明显差异,免疫细胞化学结果表明:两组细胞癌胚抗原(CEA)和细胞角蛋白7(CK7)表达均为阳性。结论:胰蛋白酶-EDTA和Ⅱ型胶原酶联合消化法能明显缩短汗腺细胞的分离时间,且不影响细胞的活性和增殖特性。
【作者单位】： 天津医科大学;解放军总医院第一附属医院 全军创伤修复与组织再生重点实验室;浙江大学医学院附属第二医院急诊科;
【关键词】： 汗腺 胰蛋白酶 胶原酶
【基金】：国家973计划资助项目(2012CB518105) 国家自然科学基金项目(81121004,81230041,81171798)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 皮肤是人体最大的器官,在抵御外界损伤,维持体温稳定,平衡物质代谢等方面起着重要的作用[1,2]。作为皮肤附属器的汗腺,在大面积深度烧伤患者中常常受到严重损伤,损伤部位分泌排汗、调节体温的功能丧失,这给患者带来极大的痛苦。目前,汗腺修复再生方面的研究,主要是诱导多能干
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 付小兵;;中国的再生医学研究:需求与转化应用[J];解放军医学杂志;2012年03期
2 田原;于利;;耳蜗外毛细胞的几种分离方法的比较及形态学观察[J];中国应用生理学杂志;2008年03期
3 赵瑛;蔡绍皙;;鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及定向诱导分化为内皮样细胞[J];中国应用生理学杂志;2010年01期
4 雷霞;伍津津;鲁元刚;朱堂友;;人汗腺腺上皮细胞快速分离培养的初步研究[J];中华皮肤科杂志;2006年02期
5 周岗,李海红,付小兵,陈伟,韩冰,白晓东,孙同柱,顾绍峰,屈振亮;人汗腺细胞的分离和纯化培养方法探讨[J];中国危重病急救医学;2005年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 雷霞;刘渤;伍津津;鲁元刚;杨亚东;;siRNA c-Met腺病毒转染对人外泌汗腺上皮细胞增殖的影响[J];中国美容医学;2010年09期
2 陈锐;;转化医学及转化医学信息学的兴起和发展[J];解放军医学杂志;2013年08期
3 白英伟;田兴松;;骨髓间充质干细胞向淋巴管内皮细胞的分化潜能[J];中国现代普通外科进展;2011年05期
4 贝绍生;曲群英;黄乃健;;人肛瘘管壁成纤维细胞的体外分离培养和鉴定[J];山东医药;2006年08期
5 贾宽;徐乐勤;李晓锋;王拥军;周重建;;一种颈椎后纵韧带细胞的原代培养方法[J];上海中医药杂志;2010年02期
6 曲萍;刘利兵;张学策;陈健康;刘芳娥;黄小军;;人肝癌组织伴生成纤维细胞的体外培养及其生物学性状的初步探讨[J];陕西医学杂志;2007年06期
7 陈世琴;于宁;叶胜难;杨仕明;翟所强;;豚鼠耳蜗外毛细胞的快速分离及活力观察[J];中华耳科学杂志;2010年04期
8 雷霞;伍津津;鲁元刚;朱堂友;龙在云;刘媛;;氯化乙酰胆碱对培养的汗腺上皮细胞内游离钙的调节作用[J];中华皮肤科杂志;2006年06期
9 陈力莹;范锟旣;王金水;余旭明;徐成;;Wnt-1基因对人表皮干细胞的分化与增殖的影响研究[J];中华损伤与修复杂志(电子版);2012年01期
10 雷霞;伍津津;鲁元刚;朱堂友;杨亚东;;肝细胞生长因子对人外泌汗腺上皮细胞促增殖作用的研究[J];中国修复重建外科杂志;2008年05期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 雷霞;人外泌汗腺腺上皮细胞的生物学特性及体外重建汗腺的实验研究[D];第三军医大学;2006年
2 王瑶;毛囊干细胞的多分化潜能及其向汗腺细胞分化的实验研究[D];南开大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 陈世琴;豚鼠耳蜗离体外毛细胞Ca~(2+)转运机制的研究[D];福建医科大学;2011年
2 龙丽芸;人外泌汗腺上皮细胞原代培养的改良[D];南昌大学;2009年
3 周立奉;体外重建外泌汗腺的初步研究[D];第三军医大学;2009年
4 白英伟;骨髓间充质干细胞向淋巴管内皮细胞分化潜能的研究[D];山东大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 唐s
本文编号：431004
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