结核分枝杆菌rv3295基因的原核表达及单克隆抗体的制备

发布时间：2017-07-01 23:06

  本文关键词：结核分枝杆菌rv3295基因的原核表达及单克隆抗体的制备，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增了rv3295基因;将其克隆至表达载体pET-22b中,构建了重组质粒pET-22b-Rv3295;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达出了Rv3295蛋白。通过亲和层析纯化,以该重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合筛选制备抗该重组蛋白的单克隆抗体;采用Western-blot验证单克隆抗体的特异性;通过亚型鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型。结果显示,Rv3295蛋白以可溶形式表达,蛋白质的分子质量大小为25ku。获得1株抗该重组蛋白的单克隆抗体1F7,其亚型为IgG1/κ;Western-blot结果显示,该抗体具有较好的特异性。本研究制备的Rv3295蛋白的单克隆抗体对于研究Rv3295蛋白的功能及其与DNA之间的互作奠定了基础。
【作者单位】： 吉林农业大学动物科学技术学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室;
【关键词】： 结核分枝杆菌 rv基因 原核表达 单克隆抗体
【基金】：国家重点基础研究发展计划(973)项目(2012CB518801) 国家自然科学基金项目(31201920,31272538)
【分类号】：R378.911
【正文快照】： 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)是结核病(tuberculosis)的病原菌[1],与其他由细菌引起的感染相比,结核病潜伏期长且可侵犯全身各个器官。全球约三分之一的人口感染了结核分枝杆菌,每年将导致约两百万人死亡[2]。世界卫生组织(WHO)估计每年大约新增加800万结核

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