大鼠外周血间充质干细胞的富集及生物学特性研究

发布时间：2017-09-07 08:02

  本文关键词：大鼠外周血间充质干细胞的富集及生物学特性研究

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【摘要】：目的:探究大鼠外周血间充质干细胞(PBMSC)的有效富集方法,并进一步研究其生物学特性。方法:采集经G-CSF动员的4周龄SD大鼠外周血,用密度梯度离心法分离出单个核细胞,继而采用贴壁培养法获得成纤维样集落生长细胞,绘制细胞生长曲线;应用流式细胞术(CD90、CD44、CD29、CD45、CD11b和CD79a)和免疫细胞化学染色法(CD73、CD105、CD34和HLA-DR)分析富集的第2代PBMSC的表型特征,并对其进行成骨、成软骨和成脂肪细胞诱导分化能力鉴定。结果:1原代培养6-7 d可见明显的成纤维样细胞集落生长,至培养21 d细胞生长汇合度可达80%;传代细胞贴壁能力强,形态均一,呈梭形漩涡状生长;传代培养的PBMSC于培养次日即可进入对数生长期,细胞倍增时间为39.2 h。2富集的PBMSC高表达CD90、CD44、CD29、CD73及CD105,不表达CD45、CD11b、CD79a、CD34和HLA-DR。3PBMSC分别经成骨、成软骨和成脂细胞诱导分化培养21 d后,再分别经茜素红染色显示有大量钙化结节形成,阿利新蓝染色的胞浆内有大量糖胺聚糖形成,油红O染色细胞内有大量脂滴形成。结论:采用本研究方法可从大鼠外周血中分离富集到高纯度、高丰度的PBMSC,且其具备MSC的生长特点和表型特征,并具有中胚层多系分化能力。
【作者单位】： 遵义医学院暨附属医院贵州省细胞工程重点实验室;遵义医学院暨附属医院人体解剖学教研室;
【关键词】： 外周血 间充质干细胞 诱导分化 成骨细胞 成软骨细胞 成脂细胞 大鼠
【基金】：贵州省科学技术基金资助项目(黔科合J字LKZ[2011]19号) 贵州省科技攻关资助项目(黔科合SY字[2012]3124号)
【分类号】：R329.28;Q253
【正文快照】： J Exp Hematol 2015;(2):506-511间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是干细胞与组织工程研究中采用最为广泛的种子细胞来源,尤其是骨髓来源的MSC(bone marrow-de-rived mesenchymal stem cells,BMMSC)[1-3]。研究证实,MSC广泛分布于机体的许多组织中,如骨髓、脂肪组织

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