具有H274Y突变的2009大流行H1N1协同耐药突变株生物学特性研究

发布时间：2017-09-11 08:36

  本文关键词：具有H274Y突变的2009大流行H1N1协同耐药突变株生物学特性研究

  更多相关文章： 神经氨酸酶 真核表达 酵母展示 活病毒感染 流感病毒 神经氨酸酶抑制剂 耐药突变 协同作用

【摘要】：第一部分神经氨酸酶表面展示方法的建立 目的建立有效的甲流病毒神经氨酸酶表面展示方法。 方法利用真核表达、活病毒感染、酵母展示系统获得表面展示的NA，用荧光发光法检测神经氨酸酶（NA）酶学特性，采用流式细胞仪检测其与候选抗体3种抗体的亲和力。 结果真核表达、酵母展示系统均可以使神经氨酸酶在表面展示，且具有与活病毒NA相似的特性。在候选的3种抗体中，真核表达以及病毒的NA可1、3号抗体结合，病毒的NA还能与3号抗体结合；而酵母展示系统的NA与3种抗体均不能结合。 结论活病毒感染系统适合用于NA表面展示，抗体1和3均可用于检测NA表面表达。 第二部分具有H274Y突变的2009大流行H1N1协同耐药突变株生物学特性初步研究 目的研究具有H274Y突变2009大流行H1N1协同耐药突变株病毒繁殖能力、NA酶学特性。 方法采用反向遗传学和定点突变获得A/California/04/2009(CA04)野生型以及7个突变毒株(H274Y, I222R, I222T, I222K, I222R+H274Y,I222K+H274Y, I222T+H274Y)。用荧光发光法检测NA性能，流式细胞仪检测NA表面展示，通过生长曲线测定了解病毒的繁殖能力。 结果与野生型相比，，I222T单突变对奥司他韦的敏感性下降，但并不影响病毒的生长以及NA表面展示和酶活。I222K/R突变对两种神经氨酸酶抑制剂敏感性下降，但是病毒的生长力也降低。I222K/R突变与H274Y对奥司他韦、扎那米韦都有协同耐药作用，且突变株生长力降低明显，NA表面展示和酶活也降低；而I222T+H274Y突变仅对奥司他韦有协同耐药作用，病毒生长力和NA表面展示以及酶活并没受影响。 结论2009大流行H1N1的I222R/K/T突变与H274Y有协同耐药，且影响病毒的生物学特性。
【关键词】：神经氨酸酶 真核表达 酵母展示 活病毒感染 流感病毒 神经氨酸酶抑制剂 耐药突变 协同作用
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373.13
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-15
• 参考文献14-15
• 第一部分 神经氨酸酶表面展示方法的建立15-24
• 1 材料与方法15-19
• 2 结果19-21
• 3 讨论21-22
• 4 小结22-23
• 参考文献23-24
• 第二部分 具有 H274Y 突变的 2009 大流行 H1N1 协同耐药突变株生物学特性研究24-45
• 1 材料与方法25-34
• 2 结果34-39
• 3 讨论39-42
• 4 小结42-43
• 参考文献43-45
• 文献综述45-54
• 参考文献51-54
• 致谢54-55
• 攻读硕士学位期间发表论文55-56

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本文编号：829711