应用慢病毒系统建立高表达FTO蛋白的SV-HUC-1稳定细胞株

发布时间：2017-09-12 00:15

  本文关键词：应用慢病毒系统建立高表达FTO蛋白的SV-HUC-1稳定细胞株

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【摘要】：目的:构建慢病毒转染的肥胖相关基因(fat mass and obesity associated gene,FTO)高表达体系,并建立稳定、高效、长久高表达FTO的人永生化膀胱移行上皮SV-HUC-1稳定细胞株,为研究FTO基因在膀胱癌发生及进展中的作用打下基础。方法:从SV-HUC-1细胞提取总RNA,逆转录合成cDNA。以cDNA为模板应用PCR技术扩增FTO编码基因,将其连接入PLEX-puro表达载体(PLEX-puro-FTO),并转化至感受态大肠杆菌JM109中。对氨苄青霉素和博来霉素双重筛选的阳性克隆进行测序,鉴定插入正确后抽提质粒,将阳性重组质粒导入病毒包装细胞293T中;收集病毒上清液转染SV-HUC-1细胞,48小时后加入终浓度1μg/ml的嘌呤霉素进行药物筛选,10天后得到稳定细胞株,用Western blot测定转染后SV-HUC-1细胞中FTO蛋白的表达水平。结果:测序结果证实目的片断正确插入PLEX表达载体中,成功构建了PLEX-puro-FTO高表达载体;稳定转染高表达载体SV-HUC-1细胞的FTO蛋白表达显著高于转染空载体细胞。结论:成功构建了PLEX-puroFTO重组慢病毒质粒,并获得FTO蛋白高表达的SV-HUC-1稳定细胞株。
【作者单位】： 广州医科大学附属第一医院放疗科 广东省泌尿外科重点实验室;中山大学附属第一医院;
【关键词】： 肥胖相关基因 膀胱癌 稳定细胞株
【基金】：国家自然科学基金(编号81272350,81472999) 广东省自然科学基金(编号S2012010008908) 广州市教育局基金(编号12A015G)
【分类号】：R373
【正文快照】： 肥胖相关基因(fat mass and obesity associat-ed gene,FTO)是目前科学界找到的第一个确切与广泛人群肥胖有关的基因〔1~3〕。据报道FTO与心血管疾病〔4〕,Ⅱ型糖尿病〔5〕和乳腺癌〔6〕等多种疾病密切相关。生物信息学分析显示,FTO基因位于人类第16号染色体(16q12.2)上,含有9

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本文编号：833914