β-hCG单克隆抗体的集成分离纯化

发布时间：2017-09-12 02:34

  本文关键词：β-hCG单克隆抗体的集成分离纯化

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【摘要】：β-hCG单克隆抗体己广泛应用于妊娠反应以及妊娠相关疾病的检测中,因此分离纯化制备高纯度的β-hCG单克隆抗体具有重要的应用价值。亲和双水相萃取是将双水相萃取和亲和分配相集成,兼具两者的优点,是一种前景良好的新型分离方法,已广泛应用于生物活性物质的分离纯化中。 本论文首先研究了β-hCG单克隆抗体在以磺胺二甲基嘧啶(SM2)作为亲和配基的PEG/柠檬酸钠双水相体系中的分配效果,通过对PEG分子量及浓度、PEG-SM2加入量、柠檬酸钠浓度、pH值、抗体加入量等因素的考察,得到较优的分配体系组成：PEG40009%, PEG-SM28%,柠檬酸钠浓度12%,NaCl浓度3%,pH6.0,抗体加入量0.5mg/g,在该体系下,分配系数可达到7.6,收率为91.1%,且抗体效价基本没有损失。 在此研究基础上,开展了该亲和双水相体系直接对小鼠腹水中β-hCG单抗的纯化研究。结果表明,若进行单次萃取,则得到的β-hCG单抗纯度较低(P=36.8%),且不随萃取级数增加而改变；若采用二次萃取,先用PEG10000(5%)/柠檬酸钠(8%)的双水相体系对小鼠腹水进行萃取,分配完全后将上下相分离,在下相的基础上重新构建亲和双水相体系进行二次萃取,得到的抗体纯度大于82.1%,收率81.7%,纯化因子为5.3。
【关键词】：双水相体系 β-hCG单克隆抗体 磺胺二甲基嘧啶 分离纯化
【学位授予单位】：浙江工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 第一章 绪论10-26
• 1.1 hCG单克隆抗体10-11
• 1.2 抗体的分离纯化11-16
• 1.2.1 沉淀法12-13
• 1.2.2 色谱法13-16
• 1.3 双水相萃取技术16-22
• 1.3.1 双水相体系的形成17-18
• 1.3.2 双水相萃取的原理18-20
• 1.3.3 双水相萃取的优点20-21
• 1.3.4 双水相萃取的应用21-22
• 1.4 双水相萃取与相关技术的集成化22-25
• 1.4.1 分离过程的集成化22-23
• 1.4.2 亲和双水相体系23-24
• 1.4.3 抗体纯化中亲和配基的选择24-25
• 1.5 本论文研究内容及意义25-26
• 第二章 β-hCG单克隆抗体在亲和双水相体系中的分配26-48
• 2.1 引言26-27
• 2.2 实验材料及仪器27-28
• 2.2.1 实验材料27
• 2.2.2 实验仪器27-28
• 2.3 实验方法28-33
• 2.3.1 β-hCG单克隆抗体的制备28
• 2.3.2 PEG-SM2亲和聚合物的制备28-29
• 2.3.3 双水相体系29-31
• 2.3.4 分析方法31-33
• 2.4 结果与讨论33-47
• 2.4.1 β-hCG单克隆抗体的制备33-34
• 2.4.2 PEG-SM2亲和聚合物的结构鉴定34-36
• 2.4.3 β-hCG单克隆抗体在亲和双水相体系中的分配36-47
• 2.5 小结47-48
• 第三章 双水相萃取小鼠腹水中的β-hCG单克隆抗体48-63
• 3.1 引言48
• 3.2 实验材料及仪器48
• 3.3 实验方法48-52
• 3.3.1 亲和双水相萃取小鼠腹水中的β-hCG单克隆抗体48-49
• 3.3.2 分析方法49-52
• 3.4 结果与讨论52-61
• 3.4.1 亲和双水相萃取小鼠腹水中的β-hCG单克隆抗体52-53
• 3.4.2 多级萃取小鼠腹水中的β-hCG单克隆抗体53-61
• 3.5 小结61-63
• 第四章 结论与展望63-65
• 4.1 结论63-64
• 4.2 展望64-65
• 参考文献65-70
• 致谢70-71
• 攻读硕士学位期间发表的论文71

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