凡纳滨对虾过敏原蛋白Lit v 1.2的原核表达与纯化

发布时间：2017-09-12 22:04

  本文关键词：凡纳滨对虾过敏原蛋白Lit v 1.2的原核表达与纯化

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【摘要】：目的:诱导表达凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)过敏原蛋白Lit v 1.2,并利用6-His标签获得纯化蛋白。方法:用NdeⅠ和PstⅠ双酶切实验室前期构建保存的p GEM-T-Lit v 1.2质粒,将目的基因与表达载体p ET44a连接,转入表达菌株Rosetta,通过氨苄青霉素(Amp)抗性基因筛选,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得Lit v 1.2蛋白。通过亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化效果。结果:成功构建了重组质粒p ET44a-Lit v 1.2,SDS-PAGE结果显示Lit v1.2基因在大肠杆菌Rosetta中获得高效的可溶性表达,蛋白质分子量与理论值相符,且获得的目标蛋白纯度高。结论:本研究通过原核表达及亲和层析获得高产量、高纯度的凡纳滨对虾过敏原蛋白Lit v 1.2,为进一步研究Lit v 1.2的免疫学特性奠定基础。
【作者单位】： 广州医科大学附属第二医院广东省过敏反应与免疫重点实验室/呼吸疾病国家重点实验室;
【关键词】： 凡纳滨对虾 过敏原 原肌球蛋白 重组表达 蛋白纯化
【基金】：国家重大科技专项(2014ZX08011-005B) 广东高校科技创新项目(2013KJCX148) 广州市科技攻关(201300000159)项目的资助
【分类号】：R392
【正文快照】： 1本文受国家重大科技专项(2014ZX08011-005B)、广东高校科技创新项目(2013KJCX148)和广州市科技攻关(201300000159)项目的资助。近年来,我国食物过敏发病率呈逐年上升的趋势,食物过敏成为食品工业重要的安全问题,已经备受关注。在常见过敏食物中,虾蟹等甲壳类海产品是主要的致

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本文编号：839781