Exo70在大鼠血管平滑肌细胞中的定位与功能的初步研究

发布时间：2017-09-16 01:38

  本文关键词：Exo70在大鼠血管平滑肌细胞中的定位与功能的初步研究

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【摘要】：动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是当今严重危害着人类健康的进行性疾病，其发病机理一直是研究热点。在AS的发生过程中，来自内皮的血小板源性生长因子（platelet-derived growth factorPDGF）会使中膜的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cellVSMC）发生表型转换，并从中膜向内膜发生迁移，继而发生泡沫化并参与粥样斑块的形成。 胞外分泌复合体(exocyst)是由8个蛋白质亚基构成的复合结构，广泛存在于酵母、哺乳动物和植物中，在细胞的胞外分泌过程中起主要作用。Exo70是exocyst中的关键亚基，在酵母和哺乳动物细胞的胞外分泌过程中，Exo70主要参与介导运输囊泡与目的质膜的锚定与融合过程。此外，在哺乳动物细胞中，Exo70还参与细胞迁移、细胞连接构建等多种重要的生理过程。 本实验以培养的大鼠主动脉平滑肌细胞系A7r5和大鼠动脉粥样硬化模型为实验对象，通过免疫荧光染色，RT-PCR和冰冻切片等实验技术，对Exo70在大鼠主动脉平滑肌细胞系A7r5细胞中的表达，定位情况，迁移过程中的定位情况，以及大鼠高脂饮食诱导的AS发生过程中Exo70的表达进行了研究，旨在明确Exo70在VSMC中的表达特性及其在VSMC迁移过程中的作用，力求找到AS发生过程中新的参与因素，从而为动脉粥样硬化提供新的治疗靶点。 主要实验结果如下： 1、Exo70在大鼠主动脉平滑肌细胞系A7r5中的表达 鉴于文献尚无Exo70在主动脉平滑肌细胞中表达情况的相关报道，因此论文首先对Exo70在A7r5细胞系中的表达情况进行了研究。RT-PCR结果显示，Exo70在mRNA水平上确有表达。免疫荧光检测结果也表明Exo70在A7r5细胞中有表达，主要分布于细胞质中。 2、Exo70在大鼠胸主动脉平滑肌细胞系A7r5中的定位 在确定了Exo70在A7r5细胞中确有表达后，论文利用免疫荧光标记对Exo70在A7r5中的定位进行了研究。结果显示Exo70与Actin有明显的共定位现象，但与Tublin的共定位现象不明显。细胞松弛素B处理细胞后，胞内Actin聚合状态发生变化，此时Exo70在胞质内呈弥散分布，这说明Exo70在发挥功能时可能是依赖微丝实现的。 3、Exo70在大鼠主动脉平滑肌A7r5细胞迁移过程中的定位 论文利用免疫荧光标记研究了在A7r5划伤愈合的迁移过程中Exo70的定位情况。实验结果表明在A7r5划伤迁移细胞的边缘，存在Actin的聚集，而在此处Exo70与Actin存在明显的共定位。这说明，Exo70参与了A7r5细胞的迁移过程。 4、Exo70在动脉粥样硬化发生过程中的表达变化 为了进一步明确Exo70在动脉粥样硬化发生中的表达变化情况，论文首先构建了高脂饮食诱导的动脉粥样硬化大鼠模型，利用组织免疫荧光技术观察了病变区域Exo70的表达情况。结果表明，Exo70在大鼠主动脉平滑肌中也有表达，且表达量随着实验动物动脉粥样硬化斑块的加重增加。在斑块部位，Exo70的表达水平较正常血管组织中有显著增加。 基于本实验研究结果，我们认为，Exo70参与了主动脉平滑肌的迁移及动脉粥样斑块的形成过程。AS是多因素参与的复杂病变过程，VSMC的迁移及泡沫化在斑块形成的过程中具有重要作用，我们推测，在VSMC迁移过程中，Exo70通过与Actin相互作用，参与了微丝骨架的重组以及伪足的行成，并由此影响AS斑块形成进程。
【关键词】：动脉粥样硬化 血管平滑肌细胞 细胞迁移 Exo70
【学位授予单位】：山东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R543.5;R-332
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 综述12-26
• 1. 血管平滑肌细胞12-18
• 1.1 血管的结构12
• 1.2 动脉粥样硬化12-14
• 1.3 血管平滑肌细胞14-18
• 1.3.1 VSMC 表型转换14-15
• 1.3.2 VSMC 的增殖15-16
• 1.3.3 VSMC 迁移16-18
• 2. Exo7018-26
• 2.1 exocyst 的发现18-19
• 2.2 Exo70 的结构19-22
• 2.3 Exo70 的亚细胞定位及其与细胞骨架的相互作用22-23
• 2.4 Exo70 的功能23-26
• 实验部分26-55
• 第一章 Exo70 在大鼠主动脉平滑肌细胞系 A7r5 中的表达26-35
• 1.1 实验材料26-28
• 1.2 实验方法28-32
• 1.3 实验结果32-33
• 1.4 讨论33-35
• 第二章 Exo70 在大鼠胸主动脉平滑肌细胞系 A7r5 中的定位35-40
• 2.1 实验材料35
• 2.2 实验方法35-36
• 2.3 实验结果36-38
• 2.4 讨论38-40
• 第三章 Exo70 在大鼠胸主动脉平滑肌细胞系 A7r5 迁移过程中的定位40-45
• 3.1 实验材料40
• 3.2 实验方法40-41
• 3.3 实验结果41-43
• 3.4 讨论43-45
• 第四章 Exo70 在动脉粥样硬化发生过程中的表达变化45-55
• 4.1 实验材料45-46
• 4.2 实验方法46-48
• 4.3 实验结果48-52
• 4.4 讨论52-55
• 结论55-56
• 参考文献56-63
• 攻读硕士期间发表的文章63-64
• 致谢64

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 吴越阳;铁璐;李学军;;细胞骨架蛋白调节囊泡转运及其与神经疾病的关系[J];生理科学进展;2010年01期

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1 李莉;SIRT1在血管平滑肌细胞增殖和新生内膜形成中的作用及分子机制研究[D];北京协和医学院;2009年

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本文编号：860161