制备转基因模型小鼠的基础:人白细胞抗原A0206基因慢病毒载体构建及鉴定

发布时间：2017-09-16 08:29

  本文关键词：制备转基因模型小鼠的基础:人白细胞抗原A0206基因慢病毒载体构建及鉴定

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【摘要】：背景:有研究表明人白细胞抗原-A*0206亚型与鼻咽癌的发生正相关,但目前还没有相应的转基因动物模型,以用于从整体水平评价HLA-A*0206与鼻咽癌的关系及进一步研究免疫和基因疗法。目的:构建pL VX-CMV-人白细胞抗原-A*0206-HA-mC MV-Zs Green载体,并进行病毒包装,以用于HLA-A*0206转基因小鼠制作。方法:合成HLA-A*0206序列,利用聚合酶链式反应在5’端引入Eco RⅠ酶切位点,在3’端引入Bam HⅠ酶切位点和流感病毒血凝素标签,Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切目的片段及p LVX-CMV-m CMV-Zs Green质粒,连接酶切产物,转化到大肠杆菌JM109感受态细胞,双酶切及测序鉴定阳性重组质粒,阳性重组质粒与四质粒包装系统共转染表达SV40大T抗原的人肾上皮细胞系293T细胞,产生含目的基因的慢病毒。结果与结论:凝胶电泳及测序证实人白细胞抗原A*0206基因成功导入pL VX-CMV-mC MV-ZsG reen骨架质粒,转染293T细胞48 h后的转染率为92%。荧光法测定病毒滴度,获得病毒滴度约为5×108。结果证实,实验成功构建了含巨细胞病毒启动子、HLA-A*0206、流感病毒血凝素标签以及ZsG reen报告基因的慢病毒。
【作者单位】： 广州军区广州总医院动物实验中心;
【关键词】： 慢病毒属 鼻咽肿瘤 转基因小鼠 绿色荧光蛋白质类 组织构建 组织工程 鼻咽癌 慢病毒 人白细胞抗原 绿色荧光蛋白 四质粒包装系统 流感病毒血凝素 巨细胞病毒启动子 质粒
【基金】：广东省科学技术厅科技基础条件建设项目(2011B060300020)~~
【分类号】：R-332;R739.63
【正文快照】： 0引言Introduction人白细胞抗原A*0206基因慢病毒载体的构建及鉴定实验相关试剂及仪器:中国华南地区是鼻咽癌高发病区[1-2]。影响鼻咽癌发病试剂及仪器来源率的因素包括遗传因素[3-4]、EB病毒感染和环境因素[5-8]。HLA-A*0206 InvitrogenSimons等[9]首先通过研究华裔新加坡人,

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：861963