前列腺素E1在内质网应激诱导人正常肝细胞株L02细胞凋亡中的作用及相关机制的探讨

发布时间：2017-09-17 08:08

  本文关键词：前列腺素E1在内质网应激诱导人正常肝细胞株L02细胞凋亡中的作用及相关机制的探讨

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【摘要】：目的：近几年的研究结果表明内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ER stress)是多种肝脏疾病中的常见病理现象,脂肪酸、酒精、病毒、药物等因素可诱导肝细胞ER stress,强烈而持久的ER stress诱导肝细胞凋亡。既往研究证实前列腺素E1(prostaglandin E1, PGE1)具有保护肝细胞凋亡、促进肝细胞增殖等作用,但对其在ER stress诱导的肝细胞凋亡中的作用尚不清楚。本研究的目的是探讨PGE1对ERstress诱导正常人肝细胞L02细胞凋亡中的作用及相关机制。 方法：1、以正常人肝细胞株L02细胞为研究对象,采用不同浓度毒胡萝卜素(thapsigargin, TG)诱导L02细胞ER stress及细胞凋亡,通过流式细胞仪检测不同时间点L02细胞的凋亡率；2、用1μM TG诱导L02细胞ER stress及细胞凋亡,同时加用0.5gM及1μM浓度PGE1,观察不同时间点PGE1对TG诱导L02细胞凋亡的保护作用,用4-苯基丁酸(4-phenyl butyric acid, PBA)作阳性对照；3、用1μMTG诱导ER stress,通过蛋白免疫印迹方法(western blotting, WB)检测葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78, GRP78)、剪切型X盒结合蛋白1(spliced X-box binding protein1, sXBP-1)、CHOP (C/EBP-homologous protein)的表达判断ER stress;4、用WB法检测PGE1对TG诱导的L02细胞GRP78、sXBP-1、CHOP蛋白表达的调节作用；5、用1μM PGE1作用于L02细胞,用WB法检测不同时间点肝细胞内GRP78的表达。 结果：1、1μM TG作用于L02细胞6h后凋亡率显著升高,至48h凋亡率达到32.66%,各时间点与空白对照(NC)比较差异均有显著性意义(P0.01)。1μM、2μM及3μMTG在48h剂量依赖性增加L02细胞凋亡率,相差有显著性意义(P0.01)；2、0.5μM及1μMPGE1、5mM及10mM PBA在48h呈剂量依赖性降低TG诱导L02细胞的凋亡率(P0.01),1μMPGE1及10mMPBA在6h、24h及48h均显著降低TG诱导的L02细胞凋亡率(P0.01)；3.1μMTG作用于L02细胞后,GRP78、sXBP1、CHOP的表达显著增加,PGEl在作用6h后明显增加TG诱导的GRP78、sXBP1、CHOP的表达,随着时间的延长GRP78、sXBP1、CHOP的表达逐渐减弱,48h后3种蛋白的表达弱于TG组；4、PGE1显著诱导L02细胞GRP78表达,6h达到高峰。 结论：我们的研究证实PGE1显著减少ER stress诱导的L02细胞凋亡。PGE1减少TG诱导的L02细胞凋亡的机制可能与其早期上调GRP78蛋白的表达,后期下调GRP78蛋白的表达有关。
【关键词】：L02细胞 内质网应激 GRP78 sXBP1 凋亡
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 英文缩略词表3-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-14
• 材料与方法14-24
• 结果24-44
• 讨论44-49
• 结论49-50
• 参考文献50-56
• 病例报告：肝硬化并发乳糜胸水一例报告并文献复习56-61
• 1. 病例报告56-57
• 2. 文献复习57-58
• 3. 讨论58-59
• 参考文献59-61
• 综述：内质网应激诱导自噬的分子机制及意义61-73
• 参考文献67-73
• 课题选题来源73-74
• 致谢74-75
• 自我介绍75

【参考文献】

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本文编号：868244