抗IL-4全人源单链抗体的筛选和鉴定

发布时间：2017-09-17 18:26

  本文关键词：抗IL-4全人源单链抗体的筛选和鉴定

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【摘要】：目的表达人白细胞介素4(IL-4),从全人源单链抗体(sc Fv)文库中筛选抗IL-4全人源sc Fv并鉴定其特异性。方法采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导p ET102/IL-4/BL21表达IL-4,进行纯化鉴定。利用全人源噬菌体抗体文库表达抗IL-4全人源sc Fv,用表达的IL-4作为抗原,筛选阳性克隆菌株经PCR、酶切及测序鉴定。采用斑点杂交检测抗IL-4sc Fv的特异性。结果表达的IL-4融合蛋白相对分子质量(Mr)为27 000。采用该抗原筛选出了表达抗IL-4的阳性克隆,PCR结果显示,在约1000 bp处有扩增的目的条带。酶切结果显示,有2株克隆的指纹图谱相同,其余均不同。选取指纹图谱不同的且与IL-4结合能力强的4个sc Fv的克隆进行测序,显示有3个的序列正确。斑点杂交显示,这3株克隆表达的sc Fv均具有特异性。结论成功筛选到抗IL-4全人源sc Fv。
【作者单位】： 四川医科大学免疫学教研室;四川医科大学医学病原生物学与免疫学实验室;
【关键词】： 白细胞介素(IL-) 全人源单链抗体 筛选 鉴定
【基金】：四川省青年基金(2012JQ0018) 四川省卫生厅项目(130259) 泸州市科技局项目(2012-177)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)、IL-13是由2型辅助性T(T helper 2,Th2)细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞等细胞分泌的细胞因子,与2型炎症反应有关,在多种疾病如哮喘、过敏性皮炎、过敏性鼻炎、慢性阻塞性肺疾病等的发生机制中发挥重要作用[1-6]。研究显示[7-12,4],IL-4、IL-13

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：871008