结核分枝杆菌ClpP1重组蛋白的特性探讨及初步应用

发布时间：2017-09-18 21:29

  本文关键词：结核分枝杆菌ClpP1重组蛋白的特性探讨及初步应用

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【摘要】：目的用纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)ClpP1重组蛋白免疫新西兰白兔制备ClpP1多克隆抗体并检测其效价,间接ELISA法分析重组蛋白的抗原性,以初步评价其应用价值。方法通过SDS-PAGE确定ClpP1重组蛋白的主要表达形式,利用纯化包涵体方式对重组蛋白进行纯化;将纯化蛋白免疫新西兰白兔制备ClpP1多克隆抗体并检测其效价;再分别以纯化蛋白为抗原,制备抗体为一抗,间接ELISA法检测临床诊断结核病患者血清中抗M.tb抗体和M.tb抗原。结果 SDSPAGE显示ClpP1重组蛋白主要以包涵体表达形式存在,将纯化蛋白免疫新西兰白兔4次,取血测抗体效价为1∶64 000;Western blot结果显示制备抗体可较好的与ClpP1蛋白特异性结合;间接ELISA法结果表明,以重组蛋白为抗原测患者血清中抗M.tb抗体和以制备抗体为一抗测血清中的M.tb抗原的2实验组分别与对照组相比均具有显著性差异。结论制备了具有免疫原性的M.tb ClpP1重组蛋白及效价较高的多克隆抗体,并得出ClpP1多克隆抗体具有较好的免疫反应性,为进一步研究ClpP1重组蛋白的特性及其应用奠定了基础。
【作者单位】： 重庆医科大学病原生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心;重庆医科大学附属第一医院呼吸内科;
【关键词】： 结核分枝杆菌 ClpP重组蛋白 多克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金青年基金项目(81101216)
【分类号】：R378.911
【正文快照】： 结核病(tuberculosis,TB)是由M.tb引起的人兽共患慢性传染病,它一直是一个全球性问题,每年可造成约140万人死亡,目前对M.tb的致病机制仍不是十分清楚[1]。M.tb基因可编码142种蛋白酶,主要包括FtsH、蛋白酶体和Clp蛋白酶家族[2],其中丝氨酸蛋白水解酶(Caseinolytic protease,Cl

【参考文献】

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1 谢维欣;武建明;李杰;方永志;王洪梅;何洪彬;;肠道病毒71 VP1基因的原核表达及其抗血清的制备[J];免疫学杂志;2013年01期

2 杨雅;刘耀;李，

本文编号：877607