一株人源性轮状病毒的分离及其在Vero细胞上的适应性培养

发布时间：2017-09-18 23:35

  本文关键词：一株人源性轮状病毒的分离及其在Vero细胞上的适应性培养

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【摘要】：A群轮状病毒(Rotavirus, RV)是引起婴幼儿腹泻的主要病原体,全球每年因RV感染腹泻严重脱水造成近六十万婴幼儿死亡。我国5岁以下婴幼儿轮状病毒腹泻发病人数每年超过1000万,每年导致大约有3～4万名婴幼儿死亡。用疫苗预防RV感染是最经济、最有效的方法。目前已有单价或多价的减毒活疫苗用于RV感染的预防接种。对疫苗免疫效果观察发现不同毒株,不同血清型制备的疫苗在不同地区,不同条件下存在免疫效率的差异。研究表明,这种差异主要源于毒株的性质、地理环境条件、以及血清型的交叉保护作用。因此,研制有效的疫苗应考虑以上因素,其中选择理想毒株及细胞基质研制有效疫苗至关重要。基于此,我们期望从流行地区筛选具有病原学、流行病学意义的毒株作为疫苗的候选株。 方法：本研究采用胶体金、PAGE、PCR对收集的样品进行轮状病毒定性检测。阳性样品经处理后进行组织培养分离,第一步,在易感细胞MA104上适应培养,适应后的RV毒株转到人用疫苗研制的Vero细胞基质上适应培养。在适应性培养过程中,确定了病毒接种的最佳感染复数(multiplicity of infection, MOI),不同代次基因组图谱、基因序列,研究了病毒的复制动力学,最后进行了中和鉴别试验。结果显示：分离到的病毒为A组轮状病毒,基因组为4：2：3：2排列,基因分型为G1P [8]型。毒株经适应性培养后可使、Zero细胞产生典型的细胞病变(CPE),病毒复制能力随代次增加呈增强趋势。毒株在Vero细胞上增殖到第10代,复制稳定,感染性滴度达到7.25log CCIDso/ml,增殖高峰为96h。中和鉴别试验证实病毒培养液为所分离到的特异性病毒,无其他病毒污染。病毒传代过程的基因组检测表明,毒株遗传稳定,未发现基因组迁移及节段的变化。 结论：从腹泻样品中分离得到的人源轮状病毒毒株(命名为ZTR-68株),为G1P[8]型,具有良好的组织培养适应性及遗传稳定性。该项研究为进一步研究其生物学性质和疫苗制备提供了基础。
【关键词】：轮状病毒 分离 适应性培养 Vero细胞
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 前言7-13
• 第一部分 人源轮状病毒野毒株G1血清型的筛选分离13-29
• 一、实验材料与方法13-20
• 二、结果与分析20-25
• 三、讨论25-28
• 四、小结28-29
• 第二部分 轮状病毒ZTR-68株在Vero细胞上的适应性培养29-45
• 一、实验材料与方法29-36
• 二、结果与分析36-42
• 三、讨论42-44
• 四、小结44-45
• 参考文献45-50
• 附录50-54
• 致谢54-56
• 研究生简历56
• 攻读学位期间发表文章情况56-57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：878215