MicroRNA在造血过程中其上下游调控因子的研究

发布时间：2017-09-20 16:14

  本文关键词：MicroRNA在造血过程中其上下游调控因子的研究

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【摘要】：MicroRNA是一类长度在22个核苷酸左右的内源非编码RNA,广泛存在于动物,植物,病毒等多种生物体中。第一个被发现的mircroRNA lin-4通过与lin-4基因3’端非编码区互补配对从而使其蛋白表达水平降低。已有很多文献报道miRNA参与许多细胞生命活动,包括造血。造血是指造血干细胞分化形成各种血细胞的过程,在这个过程中,很多调节因子相互共同控制这一分化过程。已经有很多报道miRNA在造血过程中起到重要的作用。我们通过前面的研究和相关文献报道,确定可能在造血过程起到作用的microRNA,分别是mir-144/451,mir-142和mir-223。虽然miRNA在造血中的功能己近确定,但其上下游调控的靶基因还不是很清楚。我们利用生物信息学和其他相关文献报道,筛选出可能的上下游基因,再通过实验手段进一步验证。最后我们发现了mir-142的下游靶基因racl,racl是一个GTPase蛋白家族的一员,参与许多细胞生命活动。在mel细胞红系分化的过程中,mir-142有可能通过下调racl的表达抑制了mel的红系分化过程。
【关键词】：MicroRNA造血 上下游调控因子 Mir-142-3p Rac1 Mel
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R331
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 第一章 综述9-16
• 第一节 MicroRNA的形成及生物学功能9-11
• 第二节 MicroRNA与造血11-13
• 第三节 造血中的转录因子-microRNA调控网络13-16
• 第二章 实验材料和方法16-30
• 第一节 实验材料16-19
• 1.细胞株16
• 2.细胞培养16-17
• 3.质粒和引物序列17-18
• 4.抗体18
• 5.实验试剂18-19
• 6.实验仪器19
• 第二节 试验方法19-30
• 1.细胞株19
• 2.质粒的构建19-20
• 3.聚合酶链式反应(PCR)技术20-21
• 4.RNA的提取及逆转录21-22
• 5.实时定量PCR技术22-23
• 6.蛋白质兔疫印迹（Western Blotting, WB)技术23-27
• 7.稳定转染细胞系的构建27-29
• 8.Luciferase assay 技术29
• 9.联苯胺染色29-30
• 第三章 实验结果与分析30-39
• 第一部分 寻找造血相关的microRNA的上游转录因子30-33
• 第一节 建立K562稳定过表达细胞系30-31
• 第二节 在稳定过表达细胞系中检测miRNA的表达情况31-33
• 第二部分 寻找microRNA在造血中的下游IE基因33-39
• 第一节 利用网站预测候选IE基因33-35
• 第二节 生物学实验方法鉴定miRNA下游的靶基因35-39
• 第四章 总结与讨论39-40
• 参考文献40-44
• 致谢44

【共引文献】

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本文编号：889088