结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株Pup-蛋白酶体系统Pup基因、Mpa基因、Dop基因和PafA基因缺失突变株的

发布时间：2017-09-23 08:19

  本文关键词：结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株Pup-蛋白酶体系统Pup基因、Mpa基因、Dop基因和PafA基因缺失突变株的构建

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【摘要】：目的利用SOE-PCR技术和T载体技术,快速构建结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株Pup-蛋白酶体系统Pup基因、Mpa基因、Dop基因和PafA基因缺失突变株,为进一步研究结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统的功能奠定基础。方法基于同源重组原理,利用SOE-PCR技术和T载体技术分别将各待缺失基因的上下游同源臂与卡那霉素抗性基因融合,构建各基因缺失突变盒;将各基因缺失突变盒与T-Vector pMD 19(Simple)相连接,构建各基因缺失突变自杀载体;利用电穿孔技术将各载体转入H37Rv菌株,通过筛选阳性克隆、菌落PCR鉴定、DNA测序及遗传稳定性检测,获得各目的基因的缺失突变株。结果成功构建了带有1 601bp的特异性置换片段Pup-N-K和1 591bp的特异性置换片段K-Pup-C的Pup基因缺失突变株H37Rv△Pup,带有1 604bp的特异性置换片段Mpa-N-K和1 602bp的特异性置换片段K-Mpa-C的Mpa基因缺失突变株H37Rv△Mpa,带有1 515bp的特异性置换片段Dop-N-K和1509bp的特异性置换片段K-Dop-C的Dop基因缺失突变株H37Rv△Dop及带有1 590bp的特异性置换片段PafA-N-K和1 584bp的特异性置换片段K-PafA-C的PafA基因缺失突变株H37Rv△PafA,且各突变株均具有良好的遗传稳定性。结论利用SOE-PCR技术和T载体技术可以快速构建结核分枝杆菌基因缺失突变株,依据此方法成功构建了H37Rv菌株Pup-蛋白酶体系统Pup基因、Mpa基因、Dop基因和PafA基因缺失突变株,为进一步研究结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统的功能奠定了基础。
【作者单位】： 石河子大学医学院病理生理学教研室 石河子大学"新疆地方与民族高发病"教育部重点实验室;石河子市人民医院老年病一科;
【关键词】： 结核分枝杆菌 Pup-蛋白酶体系统 缺失突变株 构建
【基金】：国家自然科学基金项目(No.81260261,81160192) 新疆生产建设兵团医药专项资金项目(No.2012BA022)
【分类号】：R378.911
【正文快照】： 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)是引起结核病这一严重威胁人类健康的传染病的病原体。全世界约有1/3的人感染MTB[1]。近年来由于耐药MTB的出现,加之MTB与艾滋病病毒双重感染疫情的上升,使得全球结核病防治形势变得十分严峻[2]。一直以来,关于MTB的致病机理及耐

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2 欧阳谦;马文丽;刘翠华;郑文岭;;PhoB缺失突变株的构建及其性状的初步研究[J];广东医学;2006年01期

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1 刘翠华;人粘膜病原微生物的分子致病机理及分子诊断学研究[D];第一军医大学;2005年

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本文编号：904185