TNF-α增强小鼠骨髓间充质干细胞免疫抑制作用的探讨

发布时间：2017-09-23 13:23

  本文关键词：TNF-α增强小鼠骨髓间充质干细胞免疫抑制作用的探讨

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【摘要】：目的：探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)免疫抑制作用的影响。 方法：采用全骨髓贴壁培养法分离培养小鼠BMSCs,观察其细胞形态学变化；应用流式细胞术鉴定小鼠BMSCs表面标志物CD29、CD34和CD44的表达；应用免疫荧光法检测小鼠BMSCs的CXCR4的表达；通过油红O和阿尔新兰染色分别来鉴定BMSCs成脂和成软骨诱导；Elisa试剂盒检测细胞培养上清液中白介素-10(IL-10)和前列腺素2(PGE2)的表达；通过免疫印迹实验(Western Blot)检测培养细胞的环氧化物水解酶2(COX-2)和NF-κB蛋白水平的表达。 结果：体外培养的小鼠BMSCs快速贴壁并呈现克隆性生长,集落中心增殖的细胞大多为圆形,边缘细胞呈梭形；流式细胞术鉴定观察到小鼠BMSCs表面标志物CD29阳性表达率为84.89%,CD44阳性表达率为95.77%,而CD34呈阴性表达；免疫荧光检测到CXCR4的阳性表达率达到100%；油红O和阿尔新兰染色后明显看到BMSCs分化为脂肪细胞及软骨细胞；Elisa试剂盒检测25ng/ml和5Ong/ml TNF-α处理组上清液中IL-10的表达水平和对照组相比没有明显的增加,而在100ng/ml TNF-α刺激时,细胞上清液中IL-10的表达水平较对照组明显增加(p=0.0020.05),而细胞上清液中PGE2的表达也有相似的结果,在100ng/ml TNF-α刺激时,PGE2(p=0.020.05)的表达水平明显高于对照组,免疫印迹法检测TNF-α处理组COX-2表达水平明显高于对照组(p=0.020.05),NF-κB的表达也明显增加(p=0.0250.05)。 结论：较高浓度的TNF-α可能通过NF-κB信号通路,明显增强小鼠BMSCs的免疫抑制作用。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 肿瘤坏死因子-α 免疫抑制 小鼠
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-7
• 引言7-8
• 第一章 材料和方法8-16
• 1.1 材料8-9
• 1.1.1 主要仪器设备8
• 1.1.2 主要实验试剂8-9
• 1.2 方法9-16
• 1.2.1 实验试剂准备9-11
• 1.2.2 小鼠BMSCs的分离培养11
• 1.2.3 BMSCs的流式细胞术鉴定11-12
• 1.2.4 BMSCs的免疫荧光方法鉴定12
• 1.2.5 BMSCs的诱导分化12-13
• 1.2.5.1 BMSCs诱导分化成脂12
• 1.2.5.2 BMSCs诱导分化成软骨12-13
• 1.2.6 Elisa检测炎性因子13
• 1.2.7 Western blot对蛋白表达水平的鉴定13-15
• 1.2.7.1 蛋白质提取过程13
• 1.2.7.2 Western blot检测蛋白水平13-15
• 1.2.8 统计学分析15-16
• 第二章 实验结果16-21
• 2.1 BMSCs的形态学观察16
• 2.2 BMSCs的表型鉴定16
• 2.3 BMSCs免疫荧光法鉴定16-17
• 2.4 BMSCs的诱导分化17-18
• 2.4.1 BMSCs诱导分化成脂17-18
• 2.4.2 BMSCs诱导分化成软骨18
• 2.5 Elisa检测炎性因子18-19
• 2.6 Western blot检测蛋白表达19-21
• 第三章 讨论21-23
• 结论23-24
• 参考文献24-27
• 综述27-47
• 综述参考文献35-47
• 攻读学位期间的研究成果47-48
• 中英缩写词48-50
• 致谢50-51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 廖军义;周年;林良波;易世雄;凡廷旭;赵辰;胡宁;梁熙;司维柯;黄伟;;联合表达BMP2和Sox9促进体外培养间充质干细胞成软骨分化[J];南方医科大学学报;2014年03期

2 陈继德;徐芬芬;朱恒;李喜梅;唐博;刘元林;张毅;;细胞间黏附分子1通过活化MAPK通路调节小鼠间充质干细胞向脂肪细胞分化[J];中国实验血液学杂志;2014年01期

3 吴梦青;朱榕嘉;刘开彦;;失血性贫血小鼠骨髓间充质干细胞向成骨成脂分化的变化[J];中国实验血液学杂志;2014年01期

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本文编号：905489