Wnt5a对皮肤上皮作用的初步研究

发布时间：2017-09-24 00:27

  本文关键词：Wnt5a对皮肤上皮作用的初步研究

  更多相关文章： Wnt5a JNK 表皮 毛囊 Wnt途径 增殖

【摘要】：皮肤的上皮细胞直接与外界接触，通过不断地更新为机体提供有效的保护屏障。皮肤的表皮由多层细胞构成，基底层细胞增殖分裂能力强，不断地产生子代细胞向上分化，维持表皮的更新。毛囊是由上皮细胞和真皮细胞相互作用形成的皮肤的重要附属器官之一，依靠周期性生长来实现毛发的更新。表皮及毛囊的更新受到多种信号途径的调节。Wnt5a为非经典途径的代表，在皮肤创伤修复中发挥重要作用。近来有研究表明，Wnt5a能抑制毛囊毛干的生长。但Wnt5a在正常皮肤上皮中的作用尚不清楚，有待我们探讨。 在本研究中，我们首先采用细胞计数和BrdU掺入分析法检测Wnt5a对表皮细胞增殖的影响，然后采用半定量RT-PCR方法检测Wnt非经典途径相关信号分子的改变，最后筛选在Wnt5a处理后有显著差异的关键分子并检测其在皮肤上皮中的表达，旨在探讨Wnt5a在上皮细胞中的作用及其机制。本实验研究主要结果如下： 1.利用HEK-293细胞扩增腺病毒，获得108PFU/ml的高滴度腺病毒Ad-GFP、Ad-Wnt5a-GFP和Ad-Wnt10b-GFP。 2.采用RT-PCR、细胞免疫荧光方法，，表明Ad-Wnt5a-GFP和Ad-Wnt10b-GFP能有效感染JB6细胞。 3.采用细胞计数、 BrdU掺入分析法等方法分别检测Ad-Wnt5a-GFP与Ad-GFP处理组细胞的增殖，表明Wnt5a能抑制表皮细胞的增殖。 4.采用RT-PCR方法分别检测Ad-Wnt5a-GFP和Ad-GFP处理组细胞分化指标（K10）的变化，表明Wnt5a能抑制表皮细胞的分化。 5.采用RT-PCR、WB方法分别检测Ad-GFP、Ad-Wnt5a-GFP、Ad-Wnt10b-GFP和Ad-Wnt5a-GFP+Ad-Wnt10b-GFP处理组细胞中β-catenin mRNA及蛋白的表达，表明Wnt5a处理后抑制了细胞内经典Wnt/β-catenin信号的激活。 6.采用RT-PCR方法检测Ad-Wnt5a-GFP和Ad-GFP处理组非经典Wnt途径相关信号分子的改变，结果表明Wnt5a处理JB6细胞后激活了非经典Wnt信号通路。 7.采用IHC方法观察JNK在小鼠皮肤表皮中的表达情况，结果示JNK在小鼠表皮细胞有中等强度的表达。 8.采用IHC方法检测了Wnt5a蛋白和JNK蛋白在人头皮皮肤中表皮中的表达情况。结果示： Wnt5a蛋白在表皮基底层细胞中表达最强，基底上层表达逐渐减弱，JNK蛋白主要表达于基底上层。 9.采用IHC方法观察JNK在生后完整毛囊周期中的表达情况。结果示JNK在毛囊周期中呈动态表达。 10.采用半定量RT-PCR和WB方法检测了在小鼠毛囊周期JNKmRNA和蛋白的相对表达情况，与IHC的结果一致，证明了JNK在毛囊周期中的呈动态表达。 总之，我们通过一系列实验证明了Wnt5a在皮肤上皮细胞中的作用。首先我们检测到Wnt5a抑制表皮细胞的增殖和分化，同时检测到Wnt5a能激活非经典Wnt途径，也能抑制Wnt经典途径。Wnt5a下游信号分子JNK在皮肤中有着与Wnt5a类似的表达模式，为进一步研究Wnt5a在皮肤中的作用机制提供新的理论。
【关键词】：Wnt5a JNK 表皮 毛囊 Wnt途径 增殖
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R394
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-16
• 第一部分 Wnt5a 对表皮细胞增殖的影响16-36
• 引言16
• 1 材料与方法16-27
• 2 结果27-32
• 3 讨论32-34
• 小结34-36
• 第二部分 JNK 在皮肤上皮中的表达规律及意义36-48
• 引言36
• 1 材料与方法36-42
• 2 结果42-45
• 3 讨论45-47
• 小结47-48
• 全文总结48-50
• 参考文献50-55
• 文献综述55-62
• 参考文献59-62
• 致谢62-63
• 硕士期间发表论文63-64

【共引文献】

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本文编号：908334