不同供者来源脐带间充质干细胞生物学特性差异的初步研究

发布时间：2017-09-24 13:18

本文关键词：不同供者来源脐带间充质干细胞生物学特性差异的初步研究

【摘要】：目的：体外分离、培养人脐带间充质干细胞(Umbilical Cord derived mesenchymal stem cells, UC-MSCs),并检测细胞表面标志物CD309(血管内皮细胞生长因子受体2,VEGFR2,Flk-1)的表达,细胞分泌肝细胞生长因子(HGF)和前列腺素E2(PGE2)的量,分别分析它们与供者信息：产妇年龄、孕周、胎儿体重和性别的相关性。方法：无菌条件下收集健康胎儿脐带,采用组织块贴壁法分离培养UC-MSCs,并进行传代培养。观察细胞形态,细胞计数仪检测收获细胞数量,绘制生长曲线,流式细胞仪检测免疫表型,成骨成脂诱导分化鉴定。流式细胞仪检测培养的82份P1代细胞表面标志物CD309表达。随机抽取15份UC-MSCs传代培养至P11代。ELISA法分别检测P1、P3、P5、P7、P10和P11代UC-MSCs培养上清中细胞因子HGF和PGE2的含量。随机抽取28份UC-MSCs扩增培养,P2代细胞接种后培养48小时收获,细胞计数仪检测细胞数量,分析细胞增殖能力和供者信息(产妇年龄、孕周、胎儿体重、性别和分娩方式)的相关性。结果：培养的脐带间充质干细胞贴壁生长,呈梭形或纺锤形,传代细胞形态均一,可连续传至15代以上。通过检测原代,P3代,P10代细胞在不同生长时间细胞增殖量,绘制出生长曲线。P1代、P3代和P7代UC-MSCs的细胞表型均为CD90+/CD105+/CD166+/CD14-/CD34-/CD45-/CD79a-/HLA-DR-。P3代细胞分别通过成骨和成脂诱导分化培养,诱导分化成骨细胞和脂肪细胞。不同供者来源UC-MSCs的P1代细胞表面标志物CD309表达范围为0%-16.0%(n=82),P1代细胞CD309表达率越高,其细胞增殖倍数越高。P3代上清中HGF和PGE2含量分别为26029±11680(Pg/ml).3046±841(pg/ml)(n=15),P5代上清中HGF和PGE2含量分别为11660±5137(pg/ml).2396±569(pg/ml)(n=15)。从P1代传代培养至P11代,细胞培养上清中HGF含量随传代次数降低,PGE2含量无显著性变化。扩增培养28份UC-MSCs获得细胞增殖倍数,分析发现：产妇年龄24—26岁组增殖倍数为4.39±1.15,比31—41岁组增殖倍数2.99±0.75高；男性胎儿增殖倍数为3.92±1.17,比女性胎儿增殖倍数3.03±0.87高；胎儿体重3.5kg组增殖倍数为3.89±0.92,比≥3.5kg组增殖倍数2.87±1.19高；细胞增殖能力均是前者强于后者；孕周和分娩方式的不同细胞增殖能力无显著性差异。结论：本实验成功分离培养出人脐带间充质干细胞,并传代扩增。不同供者来源UC-MSCs细胞表面标志物CD309表达存在差异,高表达CD309的UC-MSCs细胞增殖能力更强。不同供者来源UC-MSCs分泌HGF和PEG2的量也有较大差异。随传代次数增加,细胞分泌的HGF量降低,P5代出现急剧下降,而PGE2量无明显变化。产妇年龄较小、胎儿体重较轻的男性胎儿的UC-MSCs细胞增殖能力更强。
【关键词】：人脐带间充质干细胞 细胞增殖能力 血管内皮细胞生长因子受体2 肝细胞生长因子 前列腺素E2
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
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