大鼠椎间盘巢源性干细胞的体外分离、培养和特性鉴定

发布时间：2017-09-24 19:09

  本文关键词：大鼠椎间盘巢源性干细胞的体外分离、培养和特性鉴定

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【摘要】：目的:对大鼠椎间盘干细胞巢来源的干细胞(ISN-SCs)进行体外分离、培养和特性鉴定。方法:以10周龄雄性SD大鼠作为研究对象,按照解剖区域分离椎间盘干细胞巢组织(骺板外周软骨膜部分),用Ⅱ型胶原酶消化获取细胞后进行体外培养,选用第四代细胞进行干细胞相关特性的鉴定:采用流式细胞技术测定细胞周期;MTT法测定增殖曲线;流式细胞技术检测干细胞相关表型;q PCR检测干细胞相关基因的表达水平;细胞三系诱导分化培养后采用茜素红染色及钙钴染色检测成骨分化能力,阿利新蓝染色检测成软骨分化能力,油红O染色检测成脂肪分化能力,q PCR检测多向分化相关基因的表达水平。结果:大鼠ISN-SCs呈成纤维样细胞,多触角,具有贴壁能力,是一种慢周期细胞,高表达干细胞相关阳性表面抗原分子CD29、CD90、CD44,低表达干细胞相关阴性表面抗原分子CD34、CD45、CD19、CD11b;成骨诱导分化后茜素红染色和钙钴染色均为阳性,成软骨分化后阿利新蓝染色阳性,成脂肪分化后油红O染色阳性,且各分化相关基因(成骨:Runx2、OPN、OCN;成软骨:SOX-9、COL2a1、ACAN;成脂肪:PPARγ、C/EBPα)表达水平较对照组显著增高,其与骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有相似的干细胞相关基因(NANOG、SOX-2、OCT-4)表达水平。结论:ISN-SCs具备干细胞的生物学特性,在体外经诱导后可以向软骨细胞及脂肪细胞转化,可为椎间盘的自体生物学修复研究提供良好的细胞来源。
【作者单位】： 东南大学附属中大医院脊柱外科中心;
【关键词】： 椎间盘 干细胞巢 间充质干细胞 细胞分化 细胞免疫表型
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:81272035)
【分类号】：R329
【正文快照】： east University,Nanjing,210009,China椎间盘退变性疾病(IVDD)是指因椎间盘组织自然或在各种因素刺激下退变而引起的相关疾病,其发病率较高,可以引起诸如腰痛、坐骨神经痛等一系列临床症状。目前,临床上针对IVDD的治疗方法主要为对症和手术治疗,尚不能从根源上修复退变的椎间

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本文编号：912955