PDIA3对结肠粘膜上皮细胞增殖和凋亡影响的实验研究

发布时间：2017-09-26 00:11

  本文关键词：PDIA3对结肠粘膜上皮细胞增殖和凋亡影响的实验研究

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【摘要】：目的： 研究USBS结肠代偿中PDIA3对结肠粘膜上皮细胞增殖和凋亡的影响 方法： 本课题组前期通过建立USBS大鼠模型，运用蛋白质组学技术对USBS大鼠、正常大鼠和假手术组大鼠的结肠粘膜进行研究，发现了USBS组和其他两组之间存在蛋白质二硫键异构酶A3（PDIA3）、丙酮酸激酶M1/M2等十余种差异蛋白质。本研究首先构建pcDNA3.1/hisB-hPDIA3真核表达载体，将PDIA3表达质粒转染到培养的SW480细胞中，运用Western blotting验证PDIA3在SW480细胞中的表达情况。然后按照不同的转染剂量将PDIA3转染到SW480细胞中，运用MTT法，检测PDIA3对SW480细胞增殖的作用，用流式细胞技术检测PDIA3对SW480细胞凋亡的影响。 结果： 通过DNA测序证实，克隆到pcDNA3.1/hisB载体上的PDIA3序列除148bp-1694bp之间的序列中两位点外，其余序列与参考序列完全相同。因此认为成功、正确的构建了质粒pcDNA3.1/hisB-hPDIA3。利用脂质体按照不同的转染剂量和转染时间，将pcDNA3.1/hisB-hPDIA3转染至SW480细胞，提取转染后的SW480细胞蛋白，并运用Western blotting验证蛋白表达情况。结果显示四个转染组均出现相应的蛋白质表达条带，但24h高剂量转染组，蛋白质表达最显著。按照上述的转染剂量，对SW480细胞进行转染，24h后分别经过MTT法和流式细胞技术检测PDIA3对SW480细胞增殖和凋亡的影响。MTT结果显示，三个转染组细胞的吸光值（OD）值均高于空白对照组，且三个实验组，随着转染剂量的增加，细胞的吸光值增加，，表明转染PDIA3剂量越大，细胞增殖愈明显。流式细胞技术检测细胞凋亡的结果显示三个实验组的细胞凋亡率均低于空白对照组，且三个实验组的凋亡率和转染剂量成反比。 结论： 1．成功地构建重组质粒pcDNA3.1/hisB-hPDIA3，并且所构建的质粒能在SW480细胞有效表达，确定了转染的最佳时间和最佳剂量。 2．PDIA3过表达能有效促进SW480细胞增殖，而抑制其凋亡。
【关键词】：短肠综合征 蛋白质二硫键异构酶 转染 增殖 凋亡 结肠粘膜上皮细胞
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 中文摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 前言7-11
• 材料和方法11-26
• 实验结果26-39
• 讨论39-42
• 结论42-43
• 参考文献43-46
• 附录 146-47
• 附录 247-48
• 综述48-54
• 参考文献51-54
• 致谢54

【参考文献】

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本文编号：920356