P38抑制剂体外对细粒棘球蚴原头节的作用

发布时间：2017-09-26 19:42

  本文关键词：P38抑制剂体外对细粒棘球蚴原头节的作用

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【摘要】：目的：本研究以体外培养的细粒棘球蚴原头节为研究对象，将不同浓度的P38抑制剂ML3403体外作用于细粒棘球蚴原头节，探讨P38抑制剂ML3403体外对细粒棘球蚴原头节的作用。 方法：从自然感染细粒棘球蚴病的绵羊肝脏内采集细粒棘球蚴原头节，将其加入RPMI1640培养基中体外培养，5d后，将原头节分别加入不同浓度ML3403（12.5、25、50、80、100μmol/L）中体外孵育。每组加入原头节约2000个。不同浓度ML3403作用不同时间，在光镜下观察原头节的形态变化，同时利用伊红染色的方法显示原头节的活力并绘制活力曲线；电子显微镜下观察原头节超微结构改变；用Western blot检测原头节内p38蛋白表达水平；用Caspase-3活性检测试剂盒检测原头节内caspase-3酶活性。 结果：孵育5d后，正常和DMSO对照组的原头节形态和活力几乎没有改变，而50μmol/LML3403组原头节活力下降约50.5%。通过伊红染色观察发现，随着ML3403作用时间的延长和浓度的增加，ML3403对原头节的生长抑制作用越明显。连续观察5d，100μmol/LML3403组对原头节有较强的杀伤作用，此时几乎没有存活的原头节；80μmol/L和50μmol/LML3403组的头节活力也分别仅为13.34±2.09%和49.5±1.88%。扫描电镜下观察发现ML3403作用初期，原头节体表出现指状突起、顶端体表出现皱缩，随着作用时间和浓度的增加，渐出现顶突界面缺损，吸盘变形，虫体表面出现凹陷，指状突起增多，甚至出现虫蚀样损害。透射电子显微镜下观察发现原头节体被合胞体带变薄，结构松散，囊泡扩张，微毛减少，甚至消失；部分实质细胞基质浓缩，细胞核核周隙增宽，核仁消失，核异染色质凝集，边缘化。Western bolt检测显示，ML3403可降低细粒棘球蚴原头节内p38蛋白表达水平。Caspase-3活性检测发现，较正常对照组，ML3403可使原头节的caspase-3酶活性增加。 结论：P38抑制剂ML3403在体外有明显的抗细粒棘球蚴原头节的作用，，有望成为一种新型的抗包虫药物。
【关键词】：P38抑制剂 细粒棘球蚴原头节 体外实验
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R383.33
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料12-16
• 1. 细粒棘球蚴原头节的收集12
• 2. 主要试剂12
• 3. 主要仪器设备12-13
• 4. 主要试剂配制13-16
• 方法16-21
• 1. 细粒棘球蚴原头节的分离及体外培养16
• 2. P38 抑制剂 ML3403 体外作用于细粒棘球蚴原头节16
• 3. 倒置显微镜观察 ML3403 体外对细粒棘球蚴原头节形态和活力的影响16
• 4. 扫描电子显微镜观察 ML3403 作用后原头节表面结构的变化16
• 5. 透射电子显微镜观察 ML3403 作用后原头节内部结构的变化16-17
• 6. Western blot 检测 ML3403 作用后原头节内 p38 蛋白表达水平17-18
• 7. Caspase-3 活性检测试剂盒检测 ML3403 作用后原头节体内 caspase-3 酶活性18-20
• 8. 统计学方法20-21
• 结果21-32
• 1. 光学倒置显微镜下观察 ML3403 对细粒棘球蚴原头节形态的影响21-24
• 2. ML3403 对细粒棘球蚴原头节生长的影响24-25
• 3. ML3403 对细粒棘球蚴原头节超微结构的影响25-28
• 4. ML3403 对细粒棘球蚴原头节内 p38 蛋白表达水平的影响28-31
• 5. ML3403 对细粒棘球蚴原头节内 caspase-3 酶活性的影响31-32
• 讨论32-35
• 结论35-36
• 参考文献36-39
• 文献综述39-46
• 参考文献43-46
• 致谢46-47
• 作者简历47-48
• 导师评阅表48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：925385