中国中性粒细胞MPO完全缺陷家系的分子机制研究

发布时间：2017-09-27 14:03

  本文关键词：中国中性粒细胞MPO完全缺陷家系的分子机制研究

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【摘要】：【目的】 通过对1个中性粒细胞髓过氧化物酶(Myeloperoxidase, MPO)完全缺陷家系进行系统的分子遗传学研究，阐明中国MPO完全缺陷家系的分子遗传学特征和MPO分子遗传改变对其生理学、病理学作用的影响水平及其分子机制。为进一步开展MPO生物合成机制及其生理和病理学研究提供有力的试验材料支持。 【方法】 1.收集家系血液样本，分离中性粒细胞，并抽提基因组。设计引物扩增MPO基因转录调控区和12个外显子区，分段扩增MPO基因。比较分析家系样本与正常对照间基因序列差异，绘制家系图。 2.对中性粒细胞内MPO进行活性检测、MPO细胞化学染色以及通过荧光显微镜观察MPO荧光抗体与MPO的杂交信号，从而分析MPO缺陷中性粒细胞内MPO的氧化活性、表达水平以及定位情况。聚丙烯酰胺凝胶电泳（Sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE）分离中性粒细胞匀浆样本，利用MPO抗体通过Western-Blot分析中性粒细胞中MPO的存在情况。 3.分别提取放线菌酮（Cycloheximide, CHX）处理前后中性粒细胞总RNA，利用real-time RT PCR技术检测MPO mRNA相对正常对照的表达水平，研究此突变分子机制。 【结果】 1.通过对家系基因组序列分析，发现患者MPO基因11号外显子第1805个碱基由G突变为A（TGG TAG），提前产生终止密码子，为W602X纯合子；而其家庭成员中患者母亲及儿子均为W602X杂合子，此位点为G/A。家系图谱提示此缺陷为常染色体隐性遗传。 2.患者中性粒细胞中MPO活性不到正常对照总量的5%、MPO化学染色完全阴性、荧光显微镜显示MPO荧光染色阴性、Western-Blot显示患者MPO完全缺陷，而正常对照染色阳性明显。患者女儿与儿子以上结果均接近正常对照一半。 3. Real-time RT PCR显示患者中性粒细胞MPO mRNA表达水平不到正常对照1%，而中性粒细胞经CHX处理后MPO mRNA表达水平明显增高。提示中性粒细胞内MPO mRNA存在降解，，而此降解和无义突变介导的mRNA降解（nonsense-mediated mRNAdecay, NMD)密切相关。 【结论】 本实验发现MPO完全缺陷患者一例，缺陷为11号外显子第1805位碱基G突变为A（TGG TAG）所致(NG_009629.1:c.1805GA)，即W602X纯合子突变。这一突变导致提前产生终止密码子（premature termination codon, PTC)，继而激活NMD使产生PTC的MPO mRNA降解，使MPO转录异常而导致完全缺陷。
【关键词】：中性粒细胞 髓过氧化物酶 分子机制 完全缺陷
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 英文缩略词表4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 引言9-11
• 第一部分 基因水平分析 MPO 缺陷11-20
• 1 材料和方法11-15
• 2 结果15-19
• 3 讨论19-20
• 第二部分 蛋白质水平分析 MPO 缺陷20-31
• 1 材料和方法20-27
• 2 结果27-30
• 3 讨论30-31
• 第三部分 RNA 水平分析 MPO 缺陷31-38
• 1 材料和方法31-35
• 2 结果35-37
• 3 讨论37-38
• 总结38-39
• 参考文献39-41
• 综述 髓过氧化物酶功能的研究进展41-50
• 参考文献47-50
• 致谢50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 李卫滨;朱忠勇;兰小鹏;马洪玉;;中性粒细胞髓过氧化物酶缺乏症的实验室诊断[J];临床血液学杂志(输血与检验版);2007年02期

2 胡浪;曹索奇;;用Word绘制家系图[J];西南国防医药;2009年02期

3 王建中,李建英,普程伟,袁家颖,汪润,杨宏云;白细胞髓过氧化物酶缺陷症的实验诊断[J];中华检验医学杂志;2005年02期

本文编号：930059