甘露糖受体及TLR4信号通路在尼古丁增强树突状细胞抗原交叉提呈中的作用

发布时间：2017-09-30 01:15

  本文关键词：甘露糖受体及TLR4信号通路在尼古丁增强树突状细胞抗原交叉提呈中的作用

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【摘要】：树突状细胞(dendritic cell, DCs)是表达乙酰胆碱N型受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAchR)的抗原提呈细胞(antign presenting cell, APC)。我们前期研究发现,尼古丁可调控小鼠骨髓来源的DCs表面nAchR及CD80/86等分子表达而增强DCs介导的CTL应答,尼古丁刺激DCs所表现的抗肿瘤效应提示尼古丁可调控DCs的交叉提呈能力。甘露糖受体(Mannose receptor, MR)是DCs表面重要的模式识别受体,DCs对抗原的交叉提呈不仅依赖于MR介导的抗原内吞而且也依赖于TLR4通路活化所致的TAP内体转位。但到目前为止,尚不清楚MR及TAP内体转位在尼古丁调控DCs交叉提呈中作用,尼古丁对人DCs是否也有类似的调控作用也有待于进一步验证。为此,本课题先以流式细胞术、Western Blot检测尼古丁对DCs表面MR, TLR4表达的影响；次以通路抑制剂阻遏相应激酶活性,流式细胞术、Western Blot发现尼古丁调控MR、TLR4机制；继以激光共聚焦显微镜结合基因沉默技术观察MR、TLR4信号活化在尼古丁增强DCs交叉提呈中的作用；最后以人外周血单核细胞诱导DCs,进一步验证尼古丁对DCs表面分子的调控作用及其机制,为尼古丁调控DCs的临床应用提供理论基础。 结果显示：尼古丁刺激不仅明显增加DCs表面MR和TLR4分子的表达并将DCs的吞噬能力提高约160%,而且也明显上调CD80和4-1BBL分子的表达,而nAchR特异性和非特异性拮抗剂α-银环蛇毒素和筒箭毒碱则明显逆转尼古丁对CD80、4-1BBL的上调作用,提示尼古丁经nAchR上调DCs表面MR、CD80、4-1BBL分子表达；对信号激酶磷酸化的检测显示,尼古丁在5-15分钟明显引起ERK1/2磷酸化,P13K激酶的磷酸化也在尼古丁刺激5-30分钟出现。而以LY294002和Wortmannin抑制相应激酶活性后,尼古丁对TLR4和MR分子的上调作用消失,提示尼古丁经PI3K-Akt通路上调DCs表面TLR4和MR表达；激光共聚焦显微镜观察显示,尼古丁刺激不仅增强OVA与早期内体标志分子EEA1共定位,也促进MR与EEAl的共定位,而MR基因沉默则显著抑制OVA-EEA1的共定位,提示尼古丁经调控MR表达而促进内吞抗原OVA定位于内体；对DCs交叉提呈产物SIINFEKL-H2Kb的激光共聚焦和流式细胞术检测则发现,尼古丁刺激不仅增加SIINFEKL与EEA1、Rab7、MHC I类分子共定位,也促进MHC Ⅰ类分子与EEA、Rab7的共定位和SIINFEKL-H2Kb复合物的形成,而沉默MR表达则SIINFEKL与EEA1、Rab7分子的共定位消失及SIINFEKL-H2Kb复合物的减少,提示尼古丁对DCs交叉提呈的增强作用依赖于MR介导的内吞抗原定位于内体；以LPS活化TLR4信号不仅明显增强TAP与EEA1、TAP与Rab7共定位,而且也显著增强SIINFEKL与EEA1、SIINFEKL与MHC I类分子及MHCⅠ类分子与EEA1的共定位及SIINFEKL-H2Kb复合物的形成,与MHC I类分子相反,MHC II类分子与SIINFEKL、Rab7共定位并不受到LPS影响。当以SiRNA转染沉默MyD88表达时,不仅LPS诱导的TAP内体转位明显降低,而且SIINFEKL与MHC I类分子于内体的共定位、SIINFEKL-H2Kb复合物的形成也明显降低,提示尼古丁对DCs形成SIINFEKL-MHC I类分子复合物的能力依赖于LPS诱导的MyD88介导的TAP内体转位；以人外周血来源的DCs进行的实验发现尼古丁通过nAchR-PI3K-Akt通路调控DCs表面nAchR、MR、TLR4、CD80、 CD86、4-1BBL等分子的表达,尼古丁对DCs交叉提呈能力的增强作用也依赖于MyD88介导的TAP内体转位。综上所述：本课题发现了尼古丁调控DCs表面模式识别受体的规律,初步阐明了尼古丁增强DCs交叉提呈抗原的分子机制,为开展尼古丁刺激DCs的免疫治疗提供了理论依据。
【关键词】：尼古丁 树突状细胞 交叉提呈 TLR4 CD206
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 缩略语索引4-6
• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 目录10-12
• Table of Contents12-14
• 前言14-19
• 实验材料和方法19-32
• 1 实验材料19-25
• 2 实验方法25-32
• 实验结果32-58
• 1、尼古丁增强树突状细胞对抗原的吞噬32
• 2、乙酰胆碱N型受体激动剂尼古丁上调树突状细胞表面TLR4和甘露糖受体分子表达32-33
• 3、乙酰胆碱N型受体激动剂尼古丁通过α7 nAchR上调树突状细胞表面共刺激分子CD80和4-1BBL表达33-35
• 4、尼古丁、内毒素LPS上调树突状细胞表面分子CD80、4-1BBL、MHC Ⅰ类和Ⅱ类分子表达35-37
• 5、尼古丁增强DCs抗原交叉提呈能力依赖于TLR4信号活化及蛋白酶体37-38
• 6、PI3K-Akt通路参与尼古丁调控DCs表面TLR4和MR分子表达38
• 7、尼古丁可增强MR与抗原结合并促进抗原分子定位于早期内体38-40
• 8、尼古丁对DCs交叉提呈的增强作用依赖于MR介导抗原内吞定位于内体40-42
• 9、早期内体是尼古丁增强DCs交叉提呈的关键器室42-43
• 10、TAP转位于内体与尼古丁增强DCs交叉提呈抗原能力相关43-44
• 11、α7 nAchR在尼古丁上调人DCs表面分子CD80、CD206和TLR4分子表达中发挥重要作用44-46
• 12、α7 nAchR在尼古丁上调入DCs表面分子α7 nAchR、MHC Ⅰ类和Ⅱ类分子表达发挥重要作用46-47
• 13、PI3K-Akt通路参与尼古丁调控人DCs表面分子表达47-49
• 14、TLR4信号活化促进抗原于早期内体的共定位49-51
• 15、TLR4活化所致TAP的内体转位明显增强人DCs的交叉提呈抗原能力51-52
• 16、甘露糖受体是尼古丁增强DCs交叉提呈能力的关键分子52-54
• 17、接头蛋白MyD88是尼古丁增强DCs交叉提呈的关键分子54-56
• 18、MyD88分子依赖的TAP转位是尼古丁增强DCs抗原交叉提呈的关键56-58
• 讨论58-63
• 结论63-64
• 参考文献64-72
• 致谢72-73

【参考文献】

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1 刘如玉;顾然;齐晓岚;陈佳;刘家骝;官志忠;;β-淀粉样蛋白对大鼠大脑α7尼古丁受体表达和学习记忆能力的影响[J];中国老年学杂志;2007年19期

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本文编号：945293