SELDI-TOF-MS技术对肝癌裸鼠移植瘤模型体内微量蛋白谱分析

发布时间：2017-10-06 04:06

  本文关键词：SELDI-TOF-MS技术对肝癌裸鼠移植瘤模型体内微量蛋白谱分析

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【摘要】：目的：采用Bel-7402人肝癌细胞悬液接种于3周龄BALB/C裸鼠的左肩背部皮下，构建人肝癌裸鼠移植瘤模型，观察肿瘤大小与生长时间的相关性，利用SELDI-TOF-MS技术对造模成功后不同时段的裸鼠体内差异蛋白的表达进行检测，分析这些微量蛋白的表达规律，旨在寻找新的原发性肝癌早期诊断标志物。方法：将Bel-7402人肝癌细胞复苏，传代培养3-5次后选择对数生长期细胞配置成浓度为1×107个/ml的癌细胞悬液，皮下接种于3组实验组裸鼠左肩背部，剂量为0.1ml/只，对照组裸鼠左肩背部皮下接种相同剂量无血清培养基。密切观察实验动物的肿瘤生长情况，每两周测量并记录裸鼠肿块的体积。所有裸鼠均采用摘眼球取血法，对照组和3组实验组分别在造模成功后20d、40d、60d取血0.5ml/只，然后处死裸鼠，并分离肿瘤组织送病理科进行组织切片检查。裸鼠血液标本应立即于4℃离心5min，转速为3000rpm，分离样本血清并分装编号，冻存于-80℃备用。应用SELDI-TOF-MS技术检测分析裸鼠血清标本中的微量蛋白，利用Ciphergen ProteinChip3.0和Ciphergen Biomaker Wizard3.1软件对得到的蛋白质谱图进行数据采集和分析，筛选出与肝癌相关的差异表达蛋白，并在蛋白数据库中进行检索比对。结果：裸鼠接种癌细胞悬液15-20天长出肿块，成瘤率100%。分析筛选出与肝癌相关并呈规律性变化的差异表达蛋白（P0.01）5个，相对分子质量分别为2016Da、3309Da、3442Da、3745Da、2747Da，其中前四种微量蛋白在实验组裸鼠体内表达逐渐增强，，最后一种微量蛋白在实验组裸鼠体内表达逐渐减弱。在Swiss-Prot蛋白数据库中对这5组微量蛋白进行检索和鉴定，初步结果为Protein2A、Potassium channel toxin alpha-KTx20.1、 Serine protease inhibitor2、Neurotoxin P2和LeuA leader peptide。结论：1.采用Bel-7402人肝癌细胞悬液皮下接种裸鼠构建动物肿瘤模型的方法操作简便、用时较短、成瘤率高，为肝癌的科学研究提供了有效的方法。2.利用SELDI-TOF-MS技术检测和筛选肝癌裸鼠移植瘤模型血清中的差异表达蛋白，可能发现新的肝癌诊断的血清标志物，为肝癌早期诊断研究开辟了新的途径。
【关键词】：SELDI-TOF-MS技术 原发性肝癌 蛋白质组学 裸鼠移植瘤模型
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R735.7;R-332
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-11
• 技术路线11-12
• 第一部分 人肝癌裸鼠移植瘤模型构建12-18
• 材料与方法12-18
• 第二部分 人肝癌裸鼠移植瘤模型体内微量蛋白谱分析18-23
• 材料与方法18-23
• 结果23-36
• 讨论36-48
• 结论48-49
• 参考文献49-53
• 英汉缩略词对照表53-55
• 致谢55-56
• 综述56-64
• 参考文献61-64

【参考文献】

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本文编号：980609