Sulfiredoxin-1对双氧水诱导的PC12细胞氧化应激损伤的保护作用研究

发布时间：2017-10-07 05:00

  本文关键词：Sulfiredoxin-1对双氧水诱导的PC12细胞氧化应激损伤的保护作用研究

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【摘要】：背景：氧化应激能够导致体内多种细胞及蛋白质过氧化，并对帕金森病、阿尔茨海默病以及缺血性脑病等神经系统疾病的发生发展有着重要作用。Sulfiredoxin-1(Srxn1)为一种内源性抗氧化蛋白，具有神经保护作用。然而，Srxn1在氧化应激中的作用机制还未被深入研究。 目的：探讨Srxn1对双氧水诱导的PC12细胞氧化应激损伤的抗氧化保护作用及其潜在机制。 方法：（1）用不同浓度（60uM,100uM,140uM,180uM,200uM,240uM）的H_2O_2作用于PC12细胞24h，通过MTT和LDH测定从中筛选出最适H_2O_2浓度。再用该浓度作用于PC12细胞不同时间（3h,6h,12h,24h,48h），通过MTT和LDH测定从中筛选出最适H_2O_2时间。（2）构建三条Srxn1干扰质粒载体（PLVT574，PLVT575，PLVT576）及一条阴性载体（PLVT4），通过脂质体（Lipofectamine2000）瞬时转染给PC12细胞，在倒置显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态及转染效率，用RT-PCR和Western Blot测定干扰效率。（3）用MTT及LDH试剂盒测定细胞活性及细胞损伤程度，用超氧化物歧化酶（SOD）、微量还原型谷胱甘肽测定试剂盒分析细胞内氧化应激状态。RT-PCR和Western国家自然科学基金资助（No.81070917和81271460）Blot进一步测定Srxn1的表达与2-Cys Prdxs活性之间的关系。 结果：（1）MTT和LDH测定显示，180uM H_2O_2作用于PC12细胞24h为最适氧化应激模型。（2）RT-PCR和Western Blot分析显示，与对照组相比，，PLVT574、PLVT576和PLVT4的干扰效率不明显，PLVT575的干扰效率显著（P0.01）。（3）MTT和LDH结果显示，干扰Srxn1能够导致细胞活性的降低及细胞损伤程度的增加。超氧化物歧化酶（SOD）和微量还原型谷胱甘肽测定试剂盒分析显示，SOD和GSH在干扰Srxn1的PC12细胞中表达降低。RT-PCR和Western Blot分析显示，Srxn1的减少与2-Cys Prdxs的活性降低有关，且2-Cys Prdxs的水平在H_2O_2处理的PC12细胞中升高。 结论：这些结果表明Srxn1能够保护PC12细胞免受H_2O_2诱导的氧化应激损伤，且这种保护作用与Prdxs的活性有关。Srxn1能够发挥抗氧化损伤的保护作用，因此Srxn1有望成为神经系统中氧化应激干预的新靶点。
【关键词】：氧化应激 sulfiredoxin-1 2-Cys Prdxs 神经保护
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 第一部分：PC12 细胞氧化应激模型的建立13-20
• 1 实验材料13-14
• 2 实验方法14-16
• 3 结果16-19
• 4 讨论19-20
• 第二部分：Srxn1 干扰质粒的构建及干扰效率测定20-30
• 1 实验材料20-22
• 2 试验方法22-26
• 3 结果26-28
• 4 讨论28-30
• 第三部分：Srxn1 的抗氧化作用及其潜在机制研究30-39
• 1 实验材料30-31
• 2 试验方法31-32
• 3 结果32-38
• 4 讨论38-39
• 结论39-40
• 参考文献40-44
• 文献综述44-51
• 参考文献47-51
• 致谢51-52
• 攻读硕士期间发表的论文52-53

【共引文献】

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4 唐莉;DBDCT致肝毒性的蛋白质组学及Trxl介导的氧化应激机制研究[D];山西医科大学;2013年

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6 缪叶;粘液表皮样癌耐药机制的研究[D];第四军医大学;2013年

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本文编号：987009