BMSCs静脉移植治疗dMCAO大鼠的疗效及早期作用机制

发布时间：2017-10-20 09:47

  本文关键词：BMSCs静脉移植治疗dMCAO大鼠的疗效及早期作用机制

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【摘要】：目的：探讨同种异体骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)静脉移植治疗大脑中动脉远端阻塞(Distal middle cerebral artery occlusion, dMCAO)大鼠脑缺血模型的疗效及早期作用机制。方法：90只SPF级SD雄性大鼠随机分为假手术组、缺血对照组和BMSCs静脉移植组,每组30只。采用dMCAO制备大鼠脑梗死模型,造模后1h经尾静脉移植同种异体大鼠BMSCs.移植后48h进行TTC染色测定大鼠脑梗死体积,用ELISA检测梗死灶周边皮层区IGF-1,bFGF水平,采用免疫组织化学法染色并计数梗死灶周边皮层区CD68、Iba-1染色阳性的小胶质细胞数；并分别于第1d、3d、5d和7d通过圆柱容器试验、爬格试验和平衡木试验对缺血对照组和BMSCs静脉移植大鼠组进行行为学评价。用ELISA检测2d、4d和7d外周血及梗死灶核心区炎症因子(IL-4、IL-6、IL-10、IL-1β和TNF-a)含量。结果：大鼠脑梗死48h后,BMSCs静脉移植组的梗死体积较对照组显著减小(P0.05)。在脑梗死初期,圆柱容器试验(第1d、3d、5d),爬格试验(第1d、3d)结果显示BMSCs静脉移植组的行为学较对照组改善明显(P0.05),第7d两组未检测出明显差异,平衡木试验在各时间点未能检测出行为学差异；梗死灶周边区营养因子IGF-1, bFGF较对照组显著增高(P0.05)；梗死灶周边皮层区CD68、Iba-1染色阳性的小胶质细胞数与对照组比较无统计学差异(P0.05)；外周血中的炎症因子含量检测结果示：(1)在BMSCs移植后第2d,移植组的IL-6含量较对照组显著升高(P0.05),IL-4和IL-1β有下降趋势,TNF-a有升高趋势,但无统计学差异,IL-10较对照组无明显变化。(2)在BMSCs移植后第4d,移植组的IL-6含量较对照组明显升高(P0.05), TNF-α和IL-1p含量亦有升高趋势,但无统计学差异,IL-4和IL-10含量较对照组无明显变化。(3)在BMSCs移植后第7d移植组的IL-1p和TNF-α含量较对照组显著降低(P0.05),IL-10含量有升高趋势,但无统计学差异,IL-4和IL-6含量较对照组无明显变化。脑组织中炎症因子含量检测结果示：(1)在BMSCs移植后第2d,移植组的IL-6含量较对照组有降低趋势,但无统计学差异,移植组的IL-4、IL-10、TNF-a和IL-1p含量较对照组无明显变化。(2)在BMSCs移植后第4d,移植组的IL-10、TNF-α和IL-1β含量都有升高趋势,但无统计学差异,IL-4和IL-6含量较对照组无明显变化。(3)在BMSCs移植后第7d,移植组的IL-4、IL-6及TNF-a含量虽无统计学差异,但均有下降趋势,IL-10和IL-1β含量较对照组无明显变化。结论：BMSCs静脉移植可减小dMCAO大鼠脑梗死体积,改善其行为学缺损；BMSCs移植的早期疗效可能与IGF-1、bFGF的营养作用相关；在移植后第7d外周血中TNF-a和IL-1p含量明显下降,可能与BMSCs的抗炎作用相关。
【关键词】：dMCAO 骨髓间充质干细胞 静脉移植 疗效 作用机制
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.1
【目录】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-8
• 符号说明8-10
• 前言10-11
• 1 实验材料11-13
• 1.1 实验动物及分组11
• 1.2 主要试剂11-12
• 1.3 主要仪器12-13
• 2 实验方法13-18
• 实验一：BMSCs移植治疗dMCAO大鼠的疗效13-15
• 2.1 大鼠BMSCs的提取、分离、培养和传代13
• 2.2 大鼠BMSCs的流式鉴定13
• 2.3 dMCAO动物模型制备和大鼠BMSCs静脉移植13-14
• 2.4 大鼠脑梗死体积测定14
• 2.5 dMCAO大鼠行为学测试14-15
• 实验二：大鼠梗死灶周边区IGF-1、bFGF的含量检测15-16
• 2.6 梗死灶周边区IGF-1、bFGF的含量检测15-16
• 实验三：大鼠梗死灶周边区CD68、Iba-1染色阳性的小胶质细胞的含量检测16
• 2.7 梗死灶周边区小胶质细胞CD68、Iba-1免疫荧光染色16
• 2.8 梗死灶周边区CD68、Iba-1染色阳性的小胶质细胞定量分析16
• 实验四：大鼠外周血及梗死灶核心区炎症因子IL-4、IL-6、IL-10、TNFα和IL-1β的含量检测16-18
• 2.9 外周血及梗死灶核心区炎症因子的检测16-17
• 2.10 统计学处理17-18
• 3 实验结果18-31
• 3.1 大鼠BMSCs培养和传代18
• 3.2 大鼠BMSCs表面标志抗原检测结果18-20
• 3.3 大鼠脑梗死体积测定结果20
• 3.4 脑梗死大鼠行为学检测结果20-23
• 3.5 大鼠梗死灶周边区IGF-1、bFGF的含量检测结果23-24
• 3.6 大鼠梗死灶周边区CD68、Iba-1染色阳性的小胶质细胞检测结果24-26
• 3.7 dMCAO大鼠外周血炎症因子IL-4、IL-6、IL-10、TNF和IL-1β的含量检测结果26-28
• 3.8 dMCAO大鼠梗死灶核心区炎症因子IL-4、IL-6、IL-10、TNF和IL-1β的含量检测结果28-31
• 4 讨论31-35
• 5 创新点35
• 6 结论35-36
• 参考文献36-40
• BMSCs静脉移植治疗大鼠脑梗死的作用机制研究进展40-47
• 1 骨髓间充质干细胞的概述40-41
• 2 采用静脉移植治疗的优势41
• 3 骨髓间充质干细胞主要疗效机制41-43
• 参考文献43-47
• 致谢47-48
• 攻读硕士学位期间发表论文及科研情况48-49

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