IL-17对小鼠脊髓星形胶质细胞相关炎性因子及A20、NF-κB蛋白表达影响的研究

发布时间：2017-10-20 20:18

  本文关键词：IL-17对小鼠脊髓星形胶质细胞相关炎性因子及A20、NF-κB蛋白表达影响的研究

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【摘要】：中枢神经系统(CNS)中,星形胶质细胞对维持神经系统功能的稳定以及正常的信息传递具有极其重要的作用；同时在免疫反应以及神经疾病的病理生理过程中,参与神经免疫及神经组织的发育与再生修复,并发挥重要作用。目前,中枢神经损伤的治疗依然十分困难,比如脊髓损伤(SCI)的治疗。一方面是因为,中枢神经系统组织损伤之后,其再生和修复的能力较弱,因而在受到损伤后若要恢复正常比较困难；另一方面则是,损伤后的一些病理改变可以促进并加剧了损伤部位相关的炎性反应,从而最终影响了脊髓功能的正常恢复。研究表明,SCI后一系列细胞炎性因子诱导的继发炎性反应可加重SCI程度,如水肿、炎症反应、局部缺血、再灌注损伤及过氧化集团异常变化等,从而对脊髓的正常生理功能造成严重损伤。在正常的脊髓中,星形胶质细胞为神经元的代谢提供支持,但在中枢神经系统损伤后,损伤部位的星形胶质细胞被激活,这些活化后的星形胶质细胞又被称为反应性星形胶质细胞,它们可分泌多种炎性因子,如肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)等。这些改变进一步促进了更多的星形胶质细胞被激活,同时又可造成大量胶质瘢痕的形成。因此,研究相关炎性因子对星形胶质细胞的影响及作用机制可以为未来SCI的临床治疗提供理论依据,具有重要意义。为深入研究IL-17对小鼠脊髓星形胶质细胞产生炎性因子及调控蛋白的作用机制,本研究通过以下两个方面进行探讨研究。第一部分 白介素17对小鼠脊髓星形胶质细胞表达相关炎性因子的影响目的：研究白介素17对小鼠脊髓星形胶质细胞产生相关炎性因子的表达。方法：首先,在体外培养小鼠脊髓星形胶质细胞。之后,使用不同浓度的IL-17(10、20、50、100、200 ng/ml)刺激体外培养小鼠脊髓星形胶质细胞,并于不同时间点(3h、6h、12h、24h和48h)行酶联免疫吸附检测(ELISA)法和qRT-PCR检测IL-6、TNF-α、MIP-2、MCP-1/5的表达。结果：与对照组相比,实验组小鼠脊髓星形胶质细胞在IL-17刺激6h和12h时间点上,IL-6、TNF-α、MCP-1/5和MIP-2所对应的mRNA和蛋白的表达水平分别显著升高(p0.05)。结论：IL-17刺激小鼠脊髓星形胶质细胞之后,可以促进其产生和表达相关炎性因子,而且还具有明显的时效性。第二部分 白介素17对小鼠脊髓星形胶质细胞表达A20、NF-κB调控蛋白的影响目的：研究白介素17对小鼠脊髓星形胶质细胞表达A20、NF-κB调控蛋白的影响。方法：首先,在体外培养小鼠脊髓星形胶质细胞。之后,使用IL-17(50ng/ml)刺激体外培养小鼠脊髓星形胶质细胞,并于不同时间点(3h、6h、12h、24h和48h)行蛋白质免疫印迹法(WB)和qRT-PCR检测A20、NF-κB的表达。结果：与对照组相比,实验组小鼠脊髓星形胶质细胞在IL-17刺激6h和12h时时间点上,NF-κB mRNA和蛋白的表达水平分别显著升高(p0.05),与炎性趋化因子IL-6、TNF-α、MCP-1/5和MIP-2的表达趋势一致；A20蛋白在12h时表达量显著减少(p0.05),与p-NF-κB蛋白呈相反趋势,但其mRNA的表达呈逐渐减少趋势。结论：IL-17刺激小鼠脊髓星形胶质细胞后,NF-κB的产生与上述炎性因子与趋化因子之间存在相关联系,可能起着促进作用；与此同时,A20与这些炎性因子和趋化因子的表达之间呈现出了相反的趋势,可能与其负向调控的作用有关。
【关键词】：白介素17 星形胶质细胞 炎性因子 A20 NF-κB
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.2
【目录】：

• 个人简历3-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-20
• 参考文献18-20
• 第一部分 白介素17对小鼠脊髓星形胶质细胞表达相关炎性因子的影响20-41
• 1. 实验材料20-21
• 2. 实验方法21-28
• 3. 统计学处理28
• 4. 结果28-34
• 5. 讨论34-37
• 6. 结论37-38
• 参考文献38-41
• 第二部分 白介素17对小鼠脊髓星形胶质细胞表达A20、NF-κB调控蛋白的影响41-60
• 1. 实验材料41-44
• 2. 实验方法44-48
• 3. 统计学处理48
• 4. 结果48-52
• 5. 讨论52-56
• 6. 结论56-57
• 参考文献57-60
• 英汉缩略词对照表60-62
• 综述一62-70
• 参考文献67-70
• 综述二70-83
• 参考文献78-83
• 致谢83-84
• 攻读学位期间发表的学术论文目录84

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