大鼠离断肢体灌注保存及回植的实验研究

发布时间：2017-10-28 19:00

  本文关键词：大鼠离断肢体灌注保存及回植的实验研究

  更多相关文章： 大鼠 离断肢体 器官保存液 灌注 回植

【摘要】：目的：减轻离断肢体的因缺血缺氧造成的损害,保护组织活性,延长回植手术时限,增加回植术后肢体的成活率和功能恢复。方法：选取健康成年Wistar大鼠(雌性)90只(体重250-300g)。实验一大鼠离断肢体不同灌注液一次性灌注保存效果的比较研究：选出40只大鼠随机分为4组,每组10只,即形成80只离断肢体模型,第一组为UW液灌注组；第二组为HTK液灌注组；第三组为生理盐水灌注组；第四组为不灌注组,作为对照。前三组离断后肢后以12m1/h速度灌注对应灌注液1h。自离断后将肢体放置在4℃的冰箱内保存24h。收集不同时间点的肌肉组织进行匀浆,匀浆液行ALP、ALT、AST、 CK、LDH、GLU、LAC、SOD生化检测；同时在离断6h、12h、18h、24h取肌肉组织行HE染色、PTAH染色和Bax蛋白免疫组化染色。于离断12h、24h取肌肉组织标本,透射电镜检查观察其细胞超微结构的变化。实验二大鼠离断肢体不同灌注液每隔12小时间断灌注后低温保存效果的比较研究：选出30只大鼠随机分为3组,每组10只,即形成60支离断肢体模型,第一组为UW液灌注组；第二组为HTK液灌注组；第三组生理盐水灌注组。各组于离断后0h、12h以12m1/h速度分别灌注对应灌注液1h。自离断后将肢体放置在在4℃冰箱内保存24h。收集不同时间点的肌肉组织进行匀浆,匀浆液行ALP、ALT、AST、CK、LDH、 GLU、LAC、SOD生化检测；同时在离断6h、2h、8h、24h取肌肉组织行HE染色、PTAH染色和Bax蛋白免疫组化染色,并统计细胞面积比例及免疫组化IOD值；于离断12h、24h取肌肉组织标本,透射电镜检查观察其细胞超微结构的变化。实验三大鼠离断肢体UW液灌注采用不同灌注方法保存效果的对比研究：统计分析实验一UW液一次性灌注组和实验二UW液每隔12h间断灌注组的结果.实验四大鼠离断肢体UW灌注低温保存后回植的比较研究：选出20只大鼠随机分为2组-实验组和对照组,每组10只,各组均行右后肢离断手术,对照组正常结扎腹壁浅动静脉两端并剪断,实验组结扎腹壁浅动静脉远端,并穿刺腹壁浅动脉,从中缓慢灌注UW液至股静脉、创面渗出清亮后,结扎腹壁浅近端.4℃冷藏离断右后肢3h后行回植手术,观察大鼠及其右后肢成活情况,行HE等检测。结果：实验一：随离断时间延长,灌注组的ALP、ALT、AST、CK、LDH、LAC较不灌注组低,灌注组的GLU和SOD较不灌注组高。UW组各生化指标与不灌注组各指标间存在统计学差异,其余组间部分指标存在差异。各时间点,三个灌注组较不灌注组组织HE染色、透射电镜病理变化轻微,灌注组中UW液组病理变化最轻。细胞面积比例各组间均有统计学差异(P0.05),各时间点不灌注组的细胞面积比例最小,12h前生理盐水组细胞面积比例最大,12h后UW液组细胞面积比例最大。免疫组化1OD：各组无统计学差异。实验二：生化指标间部分存在统计学差异,UW液灌注组的ALP、ALT、AST、LDH、SOD较生理盐水灌注组低。各时间点,UW液灌注组和HTK液灌注组病理变化相似,较生理盐水灌注组病理变化轻。细胞面积比例各组间均有统计学差异(P0.05),各时间点生理盐水组细胞面积比例最大。免疫组化1OD：各组无统计学差异。实验三：UW液一次性灌注组和UW液间断灌注组生化、细胞面积比例、免疫组化IOD无统计学差异,HE、PTAH及透射电镜示病理变化类似。实验四：实验组成活率为60%,对照组仅为30%,且HE染色提示UW液灌注可以减少肌肉组织中缺血再灌注损伤。结论：1、对离断肢体行灌注4℃保存,可以有效的减轻组织因缺血缺氧造成的损害,效果强于直接保存。2、使用UW液、HTK液、生理盐水对大鼠离断肢体进行一次性灌注,UW液的灌注保存效果最好。3、使用不同种灌注液对大鼠离断肢体进行每隔12h间断灌注,UW液的灌注保存效果最好。4、使用UW液对大鼠离断后肢一次性灌注和每隔12h间断灌注,两种灌注方法效果相当.5.使用UW液对大鼠离断后肢一次性灌注后,4℃冷藏保存后回植(缺血时间在3-5h),较单纯冷藏保存后回植肢体成活率高,术后成活肢体缺血缺氧损伤轻。
【关键词】：大鼠 离断肢体 器官保存液 灌注 回植
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R658
【目录】：

• 缩略语表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分 大鼠离断肢体不同灌注液一次性灌注后低温保存效果的比较研究14-48
• 材料与方法14-19
• 结果19-25
• 讨论25-34
• 附图34-48
• 第二部分 大鼠离断肢体不同灌注液每隔12小时间断灌注后保存效果的比较研究48-65
• 材料与方法48-49
• 结果49-54
• 讨论54-56
• 附图56-65
• 第三部分 大鼠离断肢体UW液灌注不同灌注方法保存效果的比较研究65-70
• 材料与方法65
• 结果65-68
• 讨论68-70
• 第四部分 大鼠离断肢体UW灌注4℃保存后回植的研究70-82
• 材料与方法70-72
• 结果72-73
• 讨论73-76
• 附图76-82
• 创新点82
• 不足之处82-83
• 结论83-84
• 参考文献84-90
• 综述 离断肢体保存的现状及研究进展90-101
• 综述参考文献96-101
• 攻读硕士期间发表文章101-102
• 致谢102

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本文编号：1109495