诱导神经干细胞脑移植后的区域特异性存活和分化及其诱发的局部免疫排斥反应

发布时间：2017-11-10 06:29

  本文关键词：诱导神经干细胞脑移植后的区域特异性存活和分化及其诱发的局部免疫排斥反应

  更多相关文章： iNSCs 存活 迁移 分化 免疫排斥反应 区域特异性

【摘要】：目的:诱导神经干细胞(induced neural stem cells,iNSCs)可通过在成体细胞内转入特定外源因子而获得,其在颅内干细胞移植治疗中枢神经系统疾病方面具有潜在的临床应用价值。有研究证实,iNSCs能够在体外条件下分化为成熟神经元等细胞,本文旨在探讨iNSCs在成体脑内不同区域的存活、迁移和分化等潜能,并对其颅内移植是否诱发局部免疫排斥反应做初步研究。方法:无血清培养基传代培养iNSCs,体外观察细胞增殖状况,并进行巢蛋白(Nestin)荧光鉴定实验;制备iNSCs细胞悬液;36只成年健康C57雄性小鼠按移植时间、移植脑区不同随机分组,每组4只,具体如下:2周移植组(海马区、皮层运动区、皮层感觉区、纹状体区),6周移植组(海马区、皮层运动区、皮层感觉区、纹状体区和空白对照组);依照分组,借助鼠脑立体定位仪,将iNSCs细胞悬液通过微量进样器移植到C57小鼠相应脑区;小鼠存活一定时间后,经灌注固定取材脑组织,移植位点连续切片;荧光显微镜下借绿色荧光标记蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)观察各脑区iNSCs存活及迁移状况;借助细胞特异性抗体Nestin、Tuj1、MAP2、GFAP等对移植位点脑组织切片进行免疫荧光鉴定,探究移植iNSCs分化状况;借助免疫细胞特异抗体CD8、CD3、CD45等探究移植位点局部免疫淋巴细胞的浸润。结果:iNSCs体外传代培养条件下能够稳定地克隆增殖,传代细胞荧光鉴定呈Nestin阳性;两时间节点,不同脑区均发现有移植iNSCs的存活,且2周时比较不同脑区iNSCs存活百分比发现存在显著差异(P0.05),纹状体区、海马区细胞存活比例相对较高;移植6周与2周对比,发现iNSCs可向周围脑实质内迁移,且迁移呈现一定区域特异性,GFP阳性细胞可沿颗粒下层形成明显迁移条带;iNSCs移植2周和6周组,各脑区存活细胞经荧光鉴定均显示Tuj1阴性;6周组部分存活细胞呈Nestin阳性,计算不同脑区Nestin阳性细胞比率,结果显示存在差异(P0.05),海马区较高;6周组,纹状体和脑皮层区的存活细胞,部分可呈GFAP阳性,海马区临近侧脑室区域,有细胞可呈MAP2阳性;6周时,各脑区移植位点存活细胞周围均发现有CD8阳性、CD3阳性、CD45阳性免疫淋巴细胞浸润,以海马区为例,移植组与对照组相比,免疫细胞数目存在显著差异(P0.05).结论:iNSCs体外培养条件下能够稳定地克隆增殖,并保持其神经干细胞特质;iNSCs能够存活并逐步整合于局部脑组织,但其在成体脑内的存活具有区域特异性;iNSCs在成体脑内具有迁移的能力,在海马齿状回可沿神经干细胞固有路径迁移;iNSCs脑移植后短期内分化效率较低,但其分化趋势呈现区域特异性;iNSCs具有一定免疫原性,其在成体脑内的移植可诱发局部免疫排斥反应的发生。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.1

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