白藜芦醇抑制关节软骨细胞去分化的体外实验研究

发布时间：2017-11-29 01:21

  本文关键词：白藜芦醇抑制关节软骨细胞去分化的体外实验研究

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【摘要】：目的研究白藜芦醇对体外单层培养条件下兔关节软骨细胞去分化的影响,并探讨白藜芦醇(Resveratrol,Resv)抑制体外单层培养条件下兔软骨细胞去分化的调节机制。方法利用胰蛋白酶联合II型胶原酶序贯消化法分离培养正常兔髋关节原代软骨细胞,并行Alcian Blue细胞染色鉴定;实验随机分五组:空白对照组,0μM Resv组,2.5μM Resv组,5μM Resv组,10μM Resv组,分别于第1、3、5、代细胞融合达80%以上时提取RNA及蛋白;CCK-8法检测各组每代软骨细胞的在450nm的吸光度,并绘制生长曲线;β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)染色对去分化的衰老细胞进行染色;倒置相差显微镜下每日观察细胞形态,RT-PCR检测蛋白多糖Aggrecan,Sirt-1,p53,p21以及P16基因的表达水平;western blot检测Aggrecan,Sirt-1,p53,p21以及P16蛋白表达水平。结果结合Alcian Blue染色及形态学观察提示所培养细胞为兔关节软骨细胞;形态学观察及SA-β-gal、Alcian Blue染色显示在体外连续单层培养条件下,软骨细胞易发生去分化,而一定浓度范围的白藜芦醇可以抑制软骨细胞去分化,且随着传代次数增加趋势愈明显,Alcian Blue染色提示低浓度Resv(2.5μM)组较其他组聚蛋白多糖表达水平高;β-半乳糖苷酶染色显示2.5μmol/LResv组蓝染的衰老细胞数明显减少;RT-PCR及western blot检测显示Resv能够显著上调Sirt1基因及蛋白表达水平,并下调P53,P21及P16基因的表达水平,抑制细胞去分化,且不影响细胞增殖。结论体外单层连续培养兔关节软骨细胞易出现去分化现象,而这一现象与细胞衰老相关,白藜芦醇可以抑制这种现象,促进细胞外基质的合成,抑制软骨细胞的去分化,这一机制与Sirt1的上调有关。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R684.3

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本文编号：1235696