老龄对脓毒症引起的不同部位骨骼肌烟碱型乙酰胆碱受体异质化的影响

发布时间：2018-02-22 18:03

本文关键词： 老龄脓毒症烟碱型乙酰胆碱受体骨骼肌异质化　出处：《重庆医科大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的研究老龄对脓毒症引起的不同部位骨骼肌烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor, nAChR)异质化的影响；从不同部位骨骼肌烟碱型乙酰胆碱受体异质化的改变探讨其可能发生的机制。方法健康成年雄性和老年雄性SPF级Sprague-Dawley (SD)大鼠各20只。成年大鼠鼠龄5月,体重220～250 g；老年大鼠鼠龄20月,体重475～500 g。采用随机数字表法,将成年大鼠随机分为2组(n=10)：假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)；老年大鼠按上述分组方式同样分成2组(n=10)。假手术组大鼠仅行开腹盲肠探查,不予盲肠结扎。脓毒症组大鼠通过盲肠结扎穿孔术(Cecal ligation and puncture,CLP)构建脓毒症模型。在建模(CLP)或假手术(Sham)的前24 h、后24 h分别取大鼠尾静脉和腹主动脉血,采用ELISA法检测血清中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子a (TNF-α)水平；在建模或假手术后24 h观察大鼠存活率；观察建模后24 h各组大鼠水平活动距离和直立次数。处死剩余存活大鼠,进行标本采集。取胫前肌和膈肌,采用免疫荧光法测定γ-nAChR和α7-nAChR在胫前肌和膈肌细胞膜上的表达和分布；通过western-blot测定不同部位肌肉中γ-nAChR、a7-nAChR和neuregulin-1三种蛋白表达量。结果(1)细胞因子水平：建模前24 h,各组间大鼠IL-6和TNF-a差异无统计学意义(P0.05)。建模后24 h与建模前比较,CLP组IL-6和TNF-a水平较Sham组明显增加,且差异有统计学意义(P0.05)。(2)各组大鼠水平活动距离和直立次数的比较：在水平活动距离比较中,与Sham-Adult组比较,Sham-Aged组、CLP-Adult组和CLP-Aged组活动距离明显下降,差异有统计学意义(P0.05); Sham组和CLP组组内比较发现,Aged组活动距离均较Adult组明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。在直立次数比较中,与Sham-Adult组比较,Sham-Aged组和CLP-Adult组直立次数下降,差异有统计学意义(P0.05)；与Sham-Aged组比较,CLP-Adult组直立次数进一步下降(P0.05)。CLP-Aged组未测出。(3)CLP组和Sham组γ-nAChR和α7-nAChR表达量：与Sham组比较,CLP组大鼠骨骼肌γ-nAChR和α7-nAChR蛋白表达明显增高,差异有统计学意义(P 0.05)。γ-nAChR和α7-nAChR蛋白分布于骨骼肌细胞膜上。(4)老年组和成年组γ-nAChR和α7-nAChR表达量：与正常成年组比较,正常老年组骨骼肌γ-nAChR和α7-nAChR蛋白表达明显增高,差异有统计学意义(P0.05)；与脓毒症成年组比较,脓毒症老年组骨骼肌γ-nAChR和α7-nAChR蛋白表达明显增高,差异有统计学意义(P0.05)；脓毒症老年组和成年组γ-nAChR和a7-nAChR表达量均较正常老年组和成年组明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。(5)胫前肌和膈肌γ-nAChR和α7-nAChR表达量：在脓毒症状态下的老年组与成年组中,与胫前肌比较,膈肌γ-nAChR和α7-nAChR蛋白表达明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。(6) γ-nAChR和α7-nAChR在Sham组和CLP组中的表达构成比：在胫前肌的Sham-Adult组中,α7-nAChR表达较γ-nAChR多,但Sham-Aged组γ-nAChR的表达开始增加。在膈肌的Sham-Adult组中,α7-nAChR表达继续减少而γ-nAChR的表达继续增加,Sham-Aged组趋势更加明显。但γ-nAChR和α7-nAChR的表达在各亚组中均维持在50%左右。在胫前肌的CLP-Adult组中,α7-nAChR表达与γ-nAChR接近。在膈肌的CLP-Adult组中,α7-nAChR表达增加而γ-nAChR的表达相对减少,CLP-Aged组中γ-nAChR表达略微增加,α7-nAChR略微减少。同样,γ-nAChR和α7-nAChR的表达在不同亚组中均维持在50%左右。(7) neuregulin-1蛋白表达量：与Sham组的成年大鼠相比,Sham组老年大鼠胫前肌和膈肌中的neuregulin-1蛋白均减少(P0.05)。同样,CLP老年组的neuregulin-1蛋白表达量较脓毒症成年组减少(P0.05),并且膈肌中neuregulin-1蛋白表达量较胫前肌减少(P0.05)。结论 (1)脓毒症和老龄均可导致骨骼肌细胞膜上幼稚型乙酰胆碱受体(γ-nAChR)和神经型乙酰胆碱受体(α7-nAChR)表达升高,并分布于骨骼肌整个细胞膜。(2)老龄可加重脓毒症导致的骨骼肌nAChR异质化。(3)脓毒症条件下膈肌较胫前肌表现出明显的受体异质化程度,可能与膈肌中a7-nAChR表达比例增加有关。(4)老龄和脓毒症对骨骼肌nAChR异质化均为主要影响因素。(5)老龄和脓毒症可能通过neuregulin-1-ErbB(神经调节蛋白受体)信号通路调节nAChR。
[Abstract]:Objective To investigate the effects of aging on the heterogeneity of skeletal muscle nicotinic acetylcholine receptor ( n = 10 ) in adult male and old male SPF Sprague - Dawley rats ( n = 10 ) . The rats were divided into 2 groups ( n = 10 ) by ELISA . ( 3 ) Compared with Sham - Adult group , the expression of 纬 - nCR and 伪7 - nCR protein in the skeletal muscle of the aged group was significantly higher than that in Sham - Adult group ( P0.05 ) . In the Sham - Adult group , the expression of 伪 7 - nR R R R and 伪 7 - nR R R R were decreased significantly ( P < 0 . 05 ) .

【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R614

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