软骨细胞与软骨单位在海藻酸钠中立体共培养生物学—力学特性分析

发布时间：2018-10-18 07:39

【摘要】：目的:探讨软骨细胞与软骨单位在海藻酸钠中立体共培养后细胞生物学-力学特性,以期为组织工程种子细胞的选择提供依据。方法:取3月龄新西兰大白兔膝关节软骨,用两种方法分别消化成软骨细胞和软骨单位,然后把细胞以2×105/ml的密度与2%海藻酸钠凝胶混匀,制成海藻酸钠小球(约50ul),实验分三组:①单纯软骨细胞组、②软骨单位+软骨细胞(1:1)共培养组、③单纯软骨单位组。HE染色法观察两者在海藻酸钠中的大致形态;在培养第7、14、21、28天时用CCK-8法测定细胞的增殖情况;RT-PCR测定不同时间点三组细胞蛋白聚糖(aggrecan,AGG)、Ⅱ型胶原(Collagen typeⅡ,Col-Ⅱ)和基质金属蛋白酶-13(Matrix metalloproteinase 13,MMP-13)的基因相对表达量;微管吸吮技术测定培养不同时间点的细胞力学特性。结果:1.细胞生长代谢的结果:培养第7天时,软骨细胞组的细胞增殖最快,共培养组的细胞增殖速度介于其它两组之间,软骨单位组细胞增殖最慢(P0.05);第14天时,共培养组的细胞增殖最快(P0.05),其它两组间差别无统计学意义;培养第21天时,软骨细胞组的细胞增殖最慢(P0.05),其它两组间差别无统计学意义;第28天时,软骨单位组的细胞增殖最快,高于其它两组(P0.05),其它两组间差别无统计学意义。2.RT-PCR结果:①Ⅱ型胶原:培养第7天时,软骨细胞组的Ⅱ型胶原相对表达量高于软骨单位组(P0.05),共培养组与其它两组比差别无统计学意义;第14天时,共培养组相对表达量高于其它两组(P0.05),其它两组间差别无统计学意义;第21天时,三组之间相比差别无统计学意义;第28天时,软骨单位组的Ⅱ型胶原相对表达量最高(P0.05),其它两组间差别无统计学意义。②AGG:培养第7天时,软骨细胞组的AGG相对表达量最高(P0.05);第14天时,三组之间差别无统计学意义;第21、28天时,软骨细胞组基因相对表达量最低(P0.05),其它两组相比差别无统计学意义。③MMP-13:MMP-13基因相对表达量在第7天与第14天时三组间相比差别均无统计学意义。第21、28天时,软骨细胞组与共培养组表达量高于共培养组(P0.05),但两者相比差别无统计学意义。3.软骨细胞粘弹性参数分析结果:①对3组软骨细胞的瞬时模量(E0)、平衡模量(E∞)、表观黏性(μ)统计分析发现,培养第7天时软骨细胞组的E0、E∞、μ均低于后两组(P0.05);共培养组介于两者之间(P0.05);软骨单位组高于其它两组(P0.05)。②培养第14天时软骨细胞组的E0、E∞、μ均低于后两组(P0.05);共培养组介于其它两者之间(P0.05);软骨单位组高于其它两组(P0.05)。③培养第21天时,软骨细胞组与共培养组的E0、E∞、μ差别无统计学意义;软骨单位组高于其它两组(P0.05)。④培养第28天时,软骨细胞组与共培养组的E0、E∞、μ差别无统计学意义;软骨单位组高于其它两组(P0.05)。结论:软骨细胞与软骨单位立体共培养能使细胞增殖和相关基因表达维持较长的时间,亦能保持较好的力学特性,但仍需进一步研究来证实,在体内是否也会得到相同的结果。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R684.3

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本文编号：2278445