2-甲氧基雌二醇对瘢痕疙瘩成纤维细胞放疗凋亡及乏氧诱导因子-1表达影响的研究

发布时间：2018-11-13 08:42

【摘要】：研究背景：瘢痕疙瘩是皮肤损伤愈合后形成的一种过度增生的异常瘢痕组织,表现为瘢痕组织过度增生,并向周围正常组织浸润性生长。因其具有独特的生长特性及临床表现,也被人们视为一种创伤愈合后形成的皮肤良性肿瘤。目前仍缺乏较为理想的治疗方法。放疗作为防止瘢痕疙瘩术后复发的治疗手段,目前在临床应用较为广泛。但由于瘢痕疙瘩自身具有放疗抵抗,对放疗不敏感,术后的复发率仍较高。乏氧被认为是肿瘤放疗不敏感的重要因素,而乏氧诱导因子-1则被认为是乏氧调控的关键因子。我们前期的实验也证实了瘢痕疙瘩组织中乏氧诱导因子高表达,且在接受放疗后,其表达会进一步升高。结合肿瘤研究领域的发现,我们推测瘢痕疙瘩组织中乏氧诱导因子-1与细胞放疗的不敏感密切相关。本实验拟要验证乏氧诱导因子-1是否是瘢痕疙瘩成纤维细胞放疗抵抗的关键因子；通过乏氧诱导因子-1的抑制剂2ME2抑制乏氧诱导因子-1的表达,能否提高瘢痕疙瘩成纤维细胞放疗的敏感性。研究目的：1.验证乏氧诱导因子-1在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的高表达及放疗后的变化。2.探讨乏氧诱导因子-1敲除后的瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长情况及其对放疗敏感性的变化。3.研究2ME2对瘢痕疙瘩成纤维细胞放疗凋亡的影响。4.初步探讨2ME2对瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用机制。研究方法：1.在常氧和乏氧两种状态下培养细胞,通过Western Blot检测放疗前后瘢痕疙瘩成纤维细胞HIF-1α的表达差异。2.通过慢病毒载体转染瘢痕疙瘩成纤维细胞,将HIF-la基因敲除。通过CCK试剂检测细胞的生长情况,流式细胞技术检测HIF-la基因敲除后的瘢痕疙瘩成纤维细胞的放射凋亡情况。3.通过用不同浓度的2ME2作用瘢痕疙瘩成纤维细胞24小时后,对细胞进行放疗。流式细胞技术检测细胞的放射凋亡情况。CCK检测细胞的生长情况。4.通过用不同浓度的2ME2作用瘢痕疙瘩成纤维细胞24小时后,通过qRT-PCR检测HIF-1α基因表达,Western Blot检测HIF-1α蛋白表达,ELISA检测血管内皮生长因子的表达。研究结果：1.在乏氧条件下,瘢痕疙瘩成纤维细胞HIF-1α蛋白表达要高于常氧条件,且在接受放疗后,HIF-1α蛋白表达量会进一步升高。2.HIF-1α基因敲除后的瘢痕疙瘩成纤维细胞对放疗更为敏感,细胞的凋亡率较对照组有明显的增加,并集中于晚期凋亡,但细胞的生长情况不受影响。3.2ME2作用后的瘢痕疙瘩成纤维细胞对放疗更为敏感,细胞的放射凋亡率较对照组有明显的增高,并集中于晚期凋亡。且随着药物浓度的增加,细胞的放射凋亡率不断升高,呈现一定的剂量依赖效应。4.2ME2对瘢痕疙瘩成纤维细胞HIF-la基因表达没有明显影响,但却能有效的抑制HIF-1α蛋白的表达。同时我们还发现2ME2对HIF-1的结构蛋白HIF-1p的表达也没有影响。此外,2ME2还能抑制VEGF因子的分泌。最后,2ME2还可以明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长,且呈现一定的剂量依赖效应。研究结论：1.HIF-1α基因敲除后的瘢痕疙瘩成纤维细胞对放疗的敏感性明显提高。2.2ME2能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞HIF-1α蛋白的表达,对其基因的表达无明显影响。3.2ME2能够增加瘢痕疙瘩成纤维细胞对放疗的敏感性,有效的提高细胞的放疗凋亡率。同时2ME2能够有效地抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长。4.HIF-1α可作为瘢痕疙瘩治疗的潜在靶点。
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【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R622

【参考文献】