移植静脉桥重塑中PCNA配体蛋白研究

发布时间：2018-12-28 08:06

【摘要】：目的:寻找移植静脉重塑中PCNA的配体蛋白。方法:我们在前期实验通过免疫组化和Western-blotting等发现PCNA的表达在术后1d呈最低值,术后7d呈峰值。证实了移植静脉桥在术后1d凋亡显著,在术后7d增殖明显,因此我们选择术后1d、术后7d和正常静脉组,建立动物模型,在术前、术后1d和术后7d取出标本,通过PCNA抗体免疫沉淀,获得生理条件下与PCNA相互作用的蛋白质,再用质谱定量分析技术对PCNA的配体蛋白进行差异分析,寻找特异性靶蛋白,并进行验证。结果:通过质谱分析共鉴定蛋白质组数1238个,肽段数5840个。蛋白质显著性分析发现与正常静脉组相比术后1d和术后7d差异蛋白数分别为30个和37个,术后1d和术后7d差异蛋白数为29个。术后1d和术后7d差异表达蛋白GO富集分析前15个注释中,氮代谢合成、细胞刺激反应富集度较高。KEGG富集度分析术后1d和术后7d中14-3-3蛋白主要集中在PI3K-AKT信号通路、Focal adhesion通路。我们通过Western-blotting验证发现,术后1d 14-3-3γ表达增加,术后7d 14-3-3γ表达减少,但高于正常对照组,14-3-3γ在术后1d表达明显增加,与急性损伤早期细胞修复有关,术后7d表达下降,与细胞急性损伤逐渐恢复,并进入增殖期有关。免疫荧光实验示14-3-3γ在术后1d表达呈高峰,术后7d、14d表达下降,但高于正常对照组,术后28d表达呈低水平,低于正常对照组。我们的免疫荧光实验证实了在术后1d急性损伤期14-3-3γ表达呈高峰,随着损伤的消退,移植静脉逐渐适应了动脉环境,14-3-3γ表达逐渐下降。结论:14-3-3γ是移植静脉重塑中PCNA配体蛋白,在移植术后急性期表达显著。
[Abstract]:Objective: to search for the ligand protein of PCNA in vein graft remodeling. Methods: we found that the expression of PCNA was the lowest on the 1st day after operation and the peak at 7 days after operation by immunohistochemistry and Western-blotting. It was proved that the graft was apoptotic at 1 day after operation and proliferated obviously at 7 days after operation. So we chose the group of vein grafts 1 day, 7 days after operation and normal vein group to establish the animal model. The specimens were taken out before operation, 1 day after operation and 7 days after operation. The proteins interacting with PCNA under physiological conditions were obtained by immunoprecipitation of PCNA antibody. The ligands of PCNA were analyzed by mass spectrometry to find specific target proteins. Results: 1238 proteins and 5840 peptides were identified by mass spectrometry. Compared with the normal venous group, the number of differential proteins was 30 and 37 on the 1st day and 7th day, and 29 on the 1st day and the 7th day after operation respectively. In the first 15 notes of GO enrichment analysis of differential expression protein 1 day after operation and 7 days after operation, nitrogen metabolism and cell stimulating reaction enrichment were higher. 14-3-3 protein was mainly located in PI3K-AKT signal pathway 1 day after operation and 7 days after operation by KEGG enrichment analysis. Focal adhesion pathway. We found that the expression of 14-3-3 纬 increased on the 1st day after operation and decreased on the 7th day after operation, but it was higher than that in the normal control group. The expression of 14-3-3 纬 increased significantly on the 1st day after operation, which was related to the early cell repair after acute injury. The decrease of expression at 7 days after operation was related to the recovery of acute cell injury and the entry of proliferative phase. Immunofluorescence assay showed that the expression of 14-3-3 纬 peaked on the 1st day after operation, decreased on the 7th day after operation, but was higher than that in the normal control group, and was lower than that in the normal control group on the 28th day after operation, and was lower than that in the normal control group. Our immunofluorescence assay confirmed the peak expression of 14-3-3 纬 on the 1st day after acute injury. With the extinction of the injury, the vein grafts gradually adapted to the arterial environment and the expression of 14-3-3 纬 decreased gradually. Conclusion: 14-3-3 纬 is a PCNA ligand protein in vein remodeling.
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R654.2

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本文编号：2393709