FBP1在增生性瘢痕中高表达并促进成纤维细胞增殖和凋亡

发布时间：2019-02-26 18:37

【摘要】：研究背景增生性瘢痕是皮肤创伤愈合后的常见并发症,多见于创伤和烧伤创面,成纤维细胞的大量增殖和细胞外基质特别是胶原蛋白的异常沉积在增生性瘢痕的发生发展起重要作用。增生性瘢痕的不仅影响外观,可能导致无汗、瘙痒、感觉异常等不适,甚至会引起关节痉挛、肢体畸形,影响患者身心健康及社会功能。因此,如何抑制瘢痕的生长、减少瘢痕的形成一直是临床治疗关注的重点。遗憾的是,迄今为止,对于增生性瘢痕的形成机制仍未明确,临床上也缺乏确切的治疗方法。近年来,随着对病理性瘢痕机制研究的不断深入,我们认识到瘢痕的发生可能与原癌基因(如Bcl-2,Smad,c-myc)过表达使成纤维细胞增殖增多及抑癌基因(如p53,Fas,RUNX3,p27)突变使成纤维细胞凋亡减少有关,使成纤维细胞数目增多,胶原蛋白分泌旺盛。原癌基因c-myc的表达与多种肿瘤发生发展有关,在调控细胞增殖分化起重要作用,在增殖期细胞中表达较高,在静止期或分化期细胞中表达较低。FBP1是c-myc的一个远端上游元件结合蛋白(the far upstream element binging protein1,FBP),是 DNA 结合蛋白家族中的一员,参与调控c-myc在细胞中的表达。当c-myc被废除,远端的上游调控元件则不再受支持。相反,反FBPRNA中远端上游调控元件的单调性降低与内源性c-myc基因表达的下调相关。研究表明适量的FBP有利于c-myc的表达,当缺乏FBP时内源性c-myc的表达不能被维持。增生性瘢痕在组织学上表现为成纤维细胞的大量增殖及细胞外基质尤其是胶原蛋白的异常沉积,在一定程度上与肿瘤发生发展相似。已有研究表明原癌基因c-myc可促进增生性瘢痕中成纤维细胞的增殖,而FBP1参与调控c-myc在细胞中的表达。既往对FBP1的研究主要集中在肿瘤组织中,发现FBP1在肿瘤组织中高表达,尚无相关研究探索FBP1在瘢痕组织中的表达情况。因此,本文探索FBP1在人增生性瘢痕中的表达及其对成纤维细胞增殖、凋亡及胶原表达方面的影响。实验材料和方法在无菌条件下收集新鲜的正常皮肤、增生性瘢痕及瘢痕疙瘩标本,4℃C保存,4小时内送至实验室进行实验。将同一份标本分成三部分处理:一部分标本固定后进行石蜡包埋、切片,检测正常皮肤和增生性瘢痕在组织学上的差异,检测FBP1在正常皮肤和增生性瘢痕的表达;一部分组织块用于提取蛋白,检测正常皮肤和增生性瘢痕中FBP1的表达差异;一部分组织用于成纤维细胞的原代培养及传代,α-SMA免疫荧光鉴定增生性瘢痕成纤维细胞。取第2-6代增生性瘢痕成纤维细胞进行实验,将实验分为实验组和对照组,对实验组成纤维细胞加入siFBP1进行转染以降低成纤维细胞中FBP1的表达,对照组不加入siFBP1。收集实验组和对照组细胞,采用qRT-PCR法检测siFBP1效用,MTT法检测siFBP1对成纤维细胞的增殖能力的影响、流式细胞术(PI单染色法)检测siFBP1对细胞周期的影响、TUNEL染色法检测siFBP1对细胞凋亡的影响、Western Blotting检测siFBP1对成纤维细胞蛋白表达的影响。实验结果FBP1在增生性瘢痕中表达高于正常皮肤,在增生性瘢痕来源的成纤维细胞中的表达也高于正常皮肤来源的成纤维细胞。siFBP1能有效降低增生性瘢痕中成纤维细胞中FBP1表达,抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖(P0.01),使细胞周期阻滞于S期(P0.01)。TUNEL染色未显示siFBP1对成纤维细胞凋亡有明显影响,但蛋白印迹结果显示siFBP1减少增生性瘢痕成纤维细胞c-myc、collagen Ⅰ、collagenⅢ、caspase3 和 caspase9 的表达。结论FBP1在增生性瘢痕成纤维细胞中高表达,促进c-myc表达,促进增生性瘢痕成纤维细胞的增殖、凋亡和胶原蛋白表达。
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【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R622

【参考文献】