【摘要】：目的：本实验检测膜微粒(MPs, Microparticles)在体外与非体外循环下冠状动脉旁路移植(CPB-CABG, OPCABG)术前及术后的变化,包括对MPs的计数、其来源及蛋白质组学分析,比较术后MPs的变化以及两种不同的术式对MPs的影响。资料与方法：选择2014年3月至2014年11月期间在我院心脏中心行CABG的患者20例(女性5例,男性15例),平均年龄为67±13岁,平均体重为65±12 kg。CABG的纳入标准是左主干严重病变(狭窄50%)或者三支病变(三支血管狭窄75%)。根据手术方式不同随机分为A组(OPCABG)、B组(CPB-CABG)每组均10例患者,根据抽血时间不同再分为A0(OPCABG前)、A1 (OPCABG后)、B0 (CPB-CABG前)、B1 (CPB-CABG后)。分别于术前空腹12h后、手术结束后抽取静脉血液标本,并及时处理标本,利用流式细胞仪进行MPs的总数及分类计数,总数用Annexin-Ⅴ标记,并分别用CD144、CD41a、CD45标记内皮细胞来源MPs(EMPs)、血小板MPs(PMPs)和白细胞来源MPs (LMPs),通过质谱仪检测MPs的蛋白组学,并检测患者围于术期B-型钠酸肽(BNP)、C-反应蛋白(CRP)、肌红蛋白的变化(MB)。采用SPSS18.0处理数据,流式数据以(x±s)表示采用配对样本t检验,蛋白质组学的数据采集及分析采用Thermofisher Proteome Discoverer 1.3和Mascot版本：2.3.0。结果：1.患者的基本临床资料无统计学差异,两组术前BNP、CRP、MB的对比无统计学差异,术后BNP、CRP、MB均明显升高,CPB-CABG对它们的升高更显著。2.A1和Ao相比较,Annexin-Ⅴ(+)勺MPs数量明显增多,CD144(+)和CD41a(+)明显增多,CD45(+)无统计学差异。B1和B0相比较,Annexin-Ⅴ(+)的MPs数量明显增多,CD144(+)和CD41a(+)明显增多,CD45(+)变化不大。说明CPB-CABG和OPCABG对MPs都有升高作用,其中以EMPs和PMPs升高为主,LMPs无明显变化；B0和Ao相比较,差异无统计学意义；B1和A1相比较,Annexin-Ⅴ(+)、CD144(+)增多更显著,CD41a(+)、CD45(+)无统计学差异。说明两种手术方式相比较,CPB-CABG对MPs的升高更显著,以EMPs和PMPs升高为主。3.用iTRAQ技术在uniprot-human库中鉴定到的总蛋白为201个；在uniprot-human库中A1和Ao相比较,共75个差异蛋白,上调的蛋白35个,下调的蛋白40个；B1和B0相比较,共101个差异蛋白,上调的蛋白49个,下调的蛋白52个。说明两种手术方式对比相比较,CPB-CABG后差异蛋白的总数较多；两种手术方式有其同的差异蛋白(48个),在手术后出现共同下调(11个)、共同上调(14个)也有相同的差异蛋白在不同的手术方式表达相反。经CABG后,参与血小板活化过程的纤维蛋白原γ链(P02679)、血浆血管因子(P04275)表达均上调,它们的比值分别为1.337和2.336；参与补体系统激活过程的补体因子Ⅰ(P05156)补体C5(P01031)表达均上调,它们的比值分别为2.445和1.450；参与凝血过程的凝血因子Ⅻ(P00748)、凝血因子Ⅻ链(P00488)表达均上调,它们的比值分别为1.220和1.745；参与炎症趋化过程的血小板因子-4(P02776)、血小板碱性蛋白(P02775),它们的比值分别为1.479和1.274；参与信号转导过程的脂联素(Q15848)、载脂蛋白a(P08519)表达均上调,它们的比值分别为1.235和1.473。因此,这些蛋白的变化提示MPs参与血小板活化的过程、补体系统激活的过程、凝血过程、炎症的趋化过程和信号转导的过程。结论：1.在CABG后血液中MPs的水平升高,无论从数量、来源及蛋白组学都有显著变化,与BNP、CRP、MB的升高趋势是一致的,且体外CABG的升高作用更显著。2.CABG后,机体所产生的炎症、凝血系统紊乱等病理过程可能导致MPs的水平升高,因此MPs的水平可反映外科手术对机体损伤的程度。3.MPs的计数、分类计数和蛋白组学分析结果提示：MPs水平的升高及成分改变参与了全身炎症反应及凝血机制紊乱的过程,是体外循环机和外科手术创伤对机体产生病理损伤的因素之一。这种病理意义具有很大的研究必要性。4.MPs既是CABG围手术期机体损伤的结果,又是参与其病理过程的因素之一,MPs可能作为预测体外循环术后并发症的一个生物标志物。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R654.2
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