吻合血管冷冻保存同种异体骨关节移植免疫学研究

发布时间：2019-05-30 12:47

【摘要】：目的:本实验通过对SD大鼠吻合血管的经冷冻保存同种异体膝关节、未经冷冻的吻合血管的同种异体膝关节移植以及吻合血管同种异体膝关节移植短期应用Cy A的手术前后血浆中T淋巴细胞CD25+细胞比例及CD4+/CD8+值变化的检测,以及移植前后血浆中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10含量的测定,观察移植后排斥反应情况,探讨冷冻保存对吻合血管的同种异体骨关节移植的免疫反应的影响。方法:分组情况:SD大鼠55只,其中15只作为膝关节供体,空白对照组10只,吻合血管的同种异体膝关节移植组10例,吻合血管的冷冻保存的同种异体膝关节移植组10例,吻合血管的同种异体膝关节移植术后应用Cy A14天10例。参考Yaremchuk等[1]实验模型,将供体股动、静脉留取较长段,然后在腹股沟韧带处切断股动、静脉,同时保留部分肌袖,锯断股骨及胫腓骨,移植时将此带血管的膝关节移植于受体腹部皮下,血管与受体SD大鼠的股动、静脉端端吻合。冷冻组将切取的供体膝关节放入盛有15%DMSO冷冻保护剂的冻存管中,于4℃冰箱中放置1.5小时,然后置于超低温冰箱中,以1℃/min速度降温至-60℃,维持1小时,投入-196℃液氮中保存28天。移植术前自液氮中取出供体膝关节,放入37℃水浴中复温,肝素生理盐水冲洗管腔,去除低温保护剂。术后各组肌注青霉素4万U/kg.d,共用3 d;阿司匹林0.3 g,潘生丁25mg溶于250ml水中饮用,连续7 d。应用环孢霉素A组将Cy A溶于99%二甲基间酰胺(DMF),使其浓度达10mg/ml肌注5mg/kg.d,术后当天应用,连续14天。术前及术后1周、2周、3周、4周、6周、8周、10周、12周抽取各组SD大鼠的外周血,采用流氏细胞仪法检测血浆中T淋巴细胞CD25+细胞比例及CD4+/CD8+值变化。用ELISA法测定IL-2、IFN-γ,IL-4、IL-10。采用LSD-t检验进行数据的组间比较。结果:非冷冻组术后CD25+,CD4+/CD8+,IL-2,IFN-γ,IL-4,IL-10增加明显,与其他各组差异显著,冷冻组和短期应用Cy A组术后CD25+,CD4+/CD8+,IL-2,IFN-γ,IL-4,IL-10均有所增高,两者之间无统计学差异,与空白对照组数据相较有统计学意义。结论:深低温冷冻对吻合血管同种异体骨关节移植与新鲜移植短期应用Cy A对免疫原性降低程度基本相同,能够降低同种异体骨关节移植的免疫原性,利于诱导免疫耐受,具有抑制细胞因子产生以及延迟免疫排斥反应发生时间的作用。
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【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R687.4

【参考文献】