Id1基因对BMP-2维持兔髓核细胞软骨特性的影响

发布时间：2019-07-18 19:56

【摘要】：目的：构建过表达和沉默Idl基因的慢病毒载体,以兔椎间盘髓核细胞为研究对象,观察经BMP一2诱导后的髓核细胞内Idl基因的表达水平调整以后细胞分泌软骨特性因子的变化,研究Idl在BMPs维持椎间盘细胞软骨表型中的作用。方法：(1)设计针对Id1基因过表达和RNA干扰(RNAi)的序列,应用基因重组技术将目的基因片段连接到慢病毒载体,然后感染293T细胞之后进行测序鉴定与病毒滴度检测；(2)以两种慢病毒分别感染兔髓核细胞,QRT-PCR和Western blot检测髓核细胞Id1 mRNA和蛋白质的表达；(3)重组腺病毒AdBMP2感染髓核细胞后,利用已制备的两种慢病毒再次感染细胞,QRT-PCR、ELISA检测细胞表达软骨特性分子的能力与变化趋势。结果：(1)成功构建Id1基因过表达与RNAi漫病毒载体,测序结果与Id1基因序列比对后确认一致。(2)慢病毒感染髓核细胞后,Id1基因的mRNA与蛋白的表达量与正常细胞组及空载病毒感染组比,过表达组增加,RNAi组下降,符合预期结果。(3)细胞内Idl的表达增加可促进软骨特性因子col Ⅱ(0.407±0.083)和ACAN(0.284±0.074)的mRNA表达。(4)AdBMP2处理细胞后,Id1基因表达增加可使col II(0.590±0.072)和ACAN(0.351±0.066)的mRNA表达进一步显著升高；Idl表达降低时,以上因子的表达被明显抑制(col II:0.244±0.060,ACAN:0.168±0.034).结论：Idl能够促进兔椎间盘髓核细胞软骨特性分子的表达,细胞内Idl基因水平变化能够显著影响BMP-2诱导细胞分泌软骨特性因子。Idl是BMP-2维持兔髓核细胞软骨特性作用的关键因子。
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图片说明：Ｆｉｇ２－４邋Ｓ邋Ｔｈｅ邋ｉｎ化ｎｓｉｔｙ邋ｏｆ邋化ｒｇｅｔ邋ｂａｎｄ邋ｄｅｔｅｃｔｅｄ邋ｂｙ邋Ｗｅｓ化ｍ邋ｂｌｏｔ逡逑２．２．邋４邋Ｉｄｌ度病毒与ＡｄＢＭＰ２转染细化后软肯特性分子的表达逡逑ＱＲＴ－ＰＣＲ检测软骨特性分子ｃｏｌ邋ＩＩ、ＡＣＡＮ和Ｉｄｌ如表２－２、图２－５所示，（１）邋ＢＭＰ２逡逑组与ＧＦＰ姐相比，ｃｏｉｎ、ＡＣＡＮ、Ｉｄｌ的ｍＲＮＡ表达量明显增加。（２）邋Ｉｄｌ过表达慢病毒逡逑＋Ｇ巧组与ＧＦＰ组相比，ｃｏｌｌｉ、ＡＣＡＮ、Ｉｄｌ表达量均增加；ＲＮＡｉ＋ＧＦＰ组与Ｇ巧组相比逡逑Ｗ上因子表达量减少。（３）邋Ｉｄｌ过表达慢病毒＋ＢＭＰ２组与ＢＭＰ２感染组相比，Ｉｄｌ的表逡逑达增加能够最著促进ｃｏｌ邋ＩＩ、ＡＣＡＮ、Ｉｄｌ表达量显著增加；Ｉｄｌ邋ＲＮＡｉ慢病毒＋ＢＭＰ２组与逡逑ＢＭＰ２组相比，Ｉｄｌ表达减少后，ＢＭＰ２诱导软骨样特性因子分泌的作用被明显抑制。上逡逑述组间差异具有统计学意义。＜化０５）。逡逑表２－２：巧光定ｆＰＣＲ检抓各组细化ｃｏｉｎ、ＡＣＡＮ、Ｉｄｌ的ｍＲＮＡ的表达（ｎ－３，文±邋Ｓ）逡逑Ｔａｂ２－２：ｍＲＮＡｅｘｐｉ＊ｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｉｎ、ＡＣＡＮ、ＩｄｌｄｅＷｄｅｄｂ》＇ＱＲＴ－ＰＣＲ（ｆｌ—３，Ａ＂±Ｓ）逡逑
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R681.5

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