抑制GSK-3β活性对糖尿病大鼠七氟醚后处理心肌保护作用的影响

发布时间：2019-07-20 04:52

【摘要】：目的:探讨抑制糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)活性对糖尿病大鼠七氟醚后处理心肌保护作用的影响。方法:健康清洁的雄性SD大鼠,250-300g,按照腹腔内单次注射1%链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)55mg/kg同时辅以高糖分与胆固醇饲料喂养的方法建造糖尿病大鼠模型。选取符合糖尿病模型的大鼠40只,使用随机数字表的方法把它们分成5组(n=8):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚吸入处理组(SP组)、GSK-3β抑制剂SB216763组(SB组)、七氟醚与SB216763联合处理组(SS组)。采用结扎左冠状动脉前降支(Left anterior descending coronary artery,LAD)30min,松开扎线恢复冠脉血流120min的方案建造大鼠心肌缺血再灌注模型。SP组在实施血液灌注前1min吸入七氟醚,维持呼气末浓度为2.5%,持续5min。SB组于开始灌注前1min经尾静脉给予SB216763 0.2mg/kg;SS组在实施血液灌注前1min同时吸入七氟醚(维持呼气末浓度为2.5%)5min和尾静脉给予SB2167630.2mg/kg。连续监测大鼠心电图,血压,心率变化,分别于缺血前15min(T_0)、缺血15min(T_1)、再灌注120min(T_2)记录大鼠心率(HR)、收缩压(SP)、平均动脉压(MAP),并计算RPP(HR与SP的乘积)。在开始血液灌注120min后,经颈动脉抽取动脉血液,测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性和肌钙蛋白(cTnI)的含量;每组随机取4只大鼠,颈静脉灌注伊文氏蓝染液后快速处死大鼠,采用TTC-伊文氏蓝双染色法测定心肌梗死面积;每组剩下的4只大鼠处死后取心脏缺血区的组织制成石蜡切片,进行HE染色后观察心肌细胞病理损害情况;采用western blot法测定磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)表达水平。结果:与S组比较,其余各组HR、MAP、RPP在T_1、T_2时均明显下降(P0.05),而在T_0时没有明显变化(P0.05)。与I/R组比较,SB组与SS组HR、MAP、RPP在T_0、T_1时无明显差异(P0.05),但在T_2时明显升高(P0.05);而SP组HR、MAP、RPP在T_0、T_1、T_2时均无明显差异(P0.05)。与S组比较,其余各组心肌损伤加重,血清CK-MB活性与cTnI浓度变高,心肌p-GSK-3β表达下调(P0.05);与I/R组比较,SB组与SS组心肌梗死范围变小,血清CK-MB活性与cTnI浓度变低,心肌p-GSK-3β表达增强(P0.05),而SP组相关指标都未发生明显变化(P0.05)。与SB组比较,SS组心肌梗死范围变小,血清CK-MB活性与cTnI浓度变低,心肌p-GSK-3β表达增强(P0.05)。结论:糖尿病因素可以减弱七氟醚后处理对大鼠心肌的保护效应,其机制可能与心肌细胞GSK-3β磷酸化受阻有关,而抑制GSK-3β活性可以使其磷酸化而恢复七氟醚对糖尿病大鼠的心肌保护效应。
【图文】：
五组大鼠心肌组织病理学结果（HE染色×400）

n=6T0T1T2T0T1T2T0T1T2S 组 335±4 337±6 330±4 90±4 86±4 91±5 39.4±1.7 39.4±1.5 39.5±I/R 组 334±3 269±7ad278±3ad86±4 75±4ad72±3ad38.8±2.0 26.3±1.3ad27.0±SP 组 331±5 268±6ad283±7ad86±4 73±2ad74±2ad37.8±2.6 25.8±0.6ad27.9±SB 组 330±3 277±8ad321±3abd86±6 76±2abd78±2abd37.5±3.0 28.0±1.1abd33.5±SS 组 330±4 274±7ad326±3bc90±6 75±2abd89±2bc38.0±2.9 27.2±0.7ad37.8±注：与 S 组比较，aP <0.05 与 I/R 组比较，bP <0.05 与 SB 组比较，cP <0.05 与 T0比较，dP <0.02.2 心肌组织病理学改变光镜下观察结果为，S 组细胞形态大致正常，排列较为有序，胞质染色大体均一胞核居中，，形状一致；而 I/R 组与 SP 组细胞形态不规则，心肌纤维排列紊乱，胞浆有不同程度的肿胀甚至破裂，胞核排列不齐，并且出现碎裂和溶解；与之相比，S组与 SS 组的胞浆肿胀程度和细胞核的破坏程度均较轻，见图 1。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R614

【参考文献】