人胰岛移植纯化技术的研究

发布时间：2019-08-01 09:33

【摘要】：目的 糖尿病已经成为人类健康的严重威胁。胰岛移植在2000年Edmonton方案发布以后,已逐渐成为一项成熟的技术,成为治疗1型糖尿病和逆转糖尿病慢性并发症的有效方法。本实验旨在建立合适的人胰岛移植纯化方案,摸索纯化液的配置方法,为开展临床胰岛移植奠定基础。 方法 获取成人尸体胰腺,修剪后将胰腺剪成两段,从胰管内插管灌注消化液。待胰腺膨胀后剪成小块,在Ricordi腔室系统内循环消化,收集的组织经孵育后使用连续密度梯度法,分别用COBE2991细胞分离机和改良后的大瓶离心法纯化。对纯化后的胰岛经双硫腙(DTZ)染色后计算胰岛当量(IEQ)、纯度及胰岛回收率。 结果 共实施九次胰岛分离纯化,前八次只使用COBE2991机进行分离纯化,纯化结果不理想算作失败。第九次尝试使用改良后的大瓶离心法,其中一半胰腺消化产物使用COBE2991纯化,另一半采用改良后的大瓶离心法纯化。结果胰腺组织重78.8g,纯化前胰岛当量为946000IEQ。使用COBE机纯化后的胰岛当量为254600IEQ,纯度64%；而使用改良后的大瓶离心法纯化后的724300IEQ,纯度90%；使用COBE机纯化的每克胰腺胰岛产量为3231IEQ/g,而改良后大瓶离心法纯化后的9192IEQ/g。使用COBE机纯化的胰岛回收率为26.9%,而使用改良后大瓶离心法的胰岛回收率为76.5%。 结论 已掌握使用COBE2991纯化胰岛的技术。使用改良后的大瓶离心法同样可以获得满意的纯化结果,且相比COBE2991细胞分离机更加经济,有望成为未来胰岛纯化的主流技术。
【图文】：

置入修剪盘，保存袋中倒入1000ml 酸纳林格注射液，结扎主副胰管，，去除多余的脂肪血管及结缔组织，将修剪完的胰腺称重(图1)。k 娭.彳。M. 一. ■ wmM图1修剪完的胰腺2.3胰腺的灌注在胰颈部将胰腺剪成两半，分别进行胰管插管，并做好结扎；安装胰腺灌注装置及管路(图2),先用少量HBSS溶液欲填充，确认连接管路完好；加入4-8T：的胶原醇到修剪盘上，重新灌注满管路系统，去除管路的气泡；连接灌注管路到针头上，开启灌注机，前4分钟压力在80mmHg,第4-10分钟压力设置180mmHg,温度4-14°C(图3)。使用50ml针筒再次灌注，使靠近胰管插管口的组织充分膨胀。再次修剪胰腺，去除多余的包膜。对修剪下的包膜称重。将胰腺剪切到5-15块1-1.5英寸长的小块组织。8
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R657.5

【共引文献】

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本文编号：2521668