ALPPS促进肝再生的动物实验研究

发布时间：2019-09-27 16:49

【摘要】：目的:在建立联合肝脏离断和门静脉结扎两步肝切除术(ALPPS)大鼠模型的基础上,初步研究ALPPS促进剩余肝脏体积(FLR)快速增长的机制、剩余肝脏是否为再生以及ALPPS术后对肝功能的影响。方法:雄性SD大鼠60只,体重200~250g,随机分成4组,每组15只,即联合门静脉结扎和肝脏离断两步肝切除(ALPPS)组,门静脉结扎(PVL)组,肝脏离断(ISS)组和假手术(Sham)组。分别监测以下几项内容:(1)术后3d、7d和10d的剩余肝体积(future liver remnant,FLR)再生率;(2)术后3d、7d和10d的肝功能变化;(3)术后3d、7d和10d血清中肝细胞生长因子(HGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的表达水平;(4)术后3d、7d和10d的肝脏组织形态学改变及病理检查。结果:1.成功建立了保留左外叶的ALPPS的大鼠模型。2.术后ALPPS组大鼠存活率为87%,PVL组大鼠存活率为93%,ISS组和Sham组大鼠存活率均为100%。3.术后3d、7d和10d时,ALPPS组的FLR再生率分别为(47.55±3.69)%、(69.53±2.35)%、(76.92±5.21)%;PVL组的FLR再生率分别为(15.38±3.24)%、(26.83±2.18)%、(38.20±4.12)%;ISS组的FLR再生率分别为(1.05±0.42)%、(2.73±1.56)%、(8.21±1.59)%;Sham组的FLR再生率分别为(0.68±0.26)%、(2.53±0.52)%、(5.37±1.15)%。这些数据显示ALPPS组的FLR再生率明显高于其余三组,差异有统计学意义(P0.01)。4.alpps组、pvl组、iss组和sham组术后各时间点血清alt和ast水平依次如下:(1)术后3d血清alt水平分别为274.80±37.13u/l、217.60±61.91u/l、172.20±48.90u/l、38.80±21.02u/l,ast水平分别为540.20±80.81u/l、362.20±46.74u/l、371.20±47.07u/l、44.80±33.97u/l;(2)术后7d血清alt水平分别为81.20±54.85u/l、76.40±53.89u/l、54.40±39.60u/l、21.20±9.36u/l,ast水平分别为100.20±68.09u/l、39.80±45.24u/l、72.40±51.41u/l、22.60±9.63u/l;(3)术后10d血清alt水平分别为16.40±2.70u/l、14.20±5.81u/l、17.80±9.20u/l、13.60±5.94u/l,ast水平分别为25.60±5.68u/l、17.40±5.23u/l、17.20±2.95u/l、22.20±6.21u/l。这些数据显示,术后3dalpps组、pvl组、iss组血清alt、ast水平明显增高,且均于术后7d逐渐降低,术后10d恢复正常,sham组变化不明显。其中术后3dalpps组alt、ast水平明显高于pvl组和iss组,差异有统计学意义(p0.01)。5.经酶联免疫吸附(elisa)方法检测得出术后3dalpps组、iss组、pvl组血清hgf、tnf-α和il-6表达水平增高,随后逐渐降低,至术后7d逐渐恢复正常。术后3dalpps组血清hgf、tnf-α和il-6依次为0.75±0.04ng/ml、85.63±15.32ng/ml、132.25±25.72ng/ml;pvl组血清hgf、tnf-α和il-6依次为0.68±0.02ng/ml、51.20±5.14ng/ml、78.20±8.23ng/ml;iss组血清hgf、tnf-α和il-6依次为0.70±0.03ng/ml、63.71±8.35ng/ml、93.21±10.95ng/ml;sham组血清hgf、tnf-α和il-6依次为0.53±0.02ng/ml、21.02±1.38ng/ml、52.54±1.69ng/ml。术后3dalpps组hgf、tnf-α和il-6表达水平明显高于其他三组,差异有统计学意义(p0.05)。6.alpps组术后3d左外叶出现肝索结构紊乱、肝叶多处灶状坏死、肝细胞脂肪变、气球样变性水肿、窦周隙变窄,淤血。pvl组术后3d出现窦周隙变窄、无结构紊乱、肝细胞肿胀、气球及空泡样变性,与alpps组比较坏死区域相对较小。两组均于术后7d肝索结构、肝细胞形态、淤血及坏死较前减轻。ISS组和Sham组肝脏细胞形态结构正常,肝细胞索排列正常。结论:1.本实验成功建立了保留左外叶的联合肝脏离断和门静脉结扎两步肝切除术(ALPPS)的大鼠模型。2.本实验得出ALPPS能促进剩余肝脏体积(FLR)快速增长,相比单纯门静脉结扎(PVL)更为显著。经病理证实是肝再生。3.ALPPS促进肝再生机制可能与门静脉分流及肝实质离断引起的创伤反应诱导细胞因子(如HGF、TNF-α、IL-6等)高表达有关。4.ALPPS术后大鼠肝功能损害明显,以术后3d最显著,术后7d-10d逐渐恢复正常。
【图文】：

大鼠肝脏分叶及Glisson系统

其中肝脏门静脉血管分布为右支、左支、乳头支、三角支、左、右中支。图 2 门静脉分支结扎示意图2.2.1 PVL 组（1）术前禁食 12 小时，但不禁饮。（2）称量大鼠体重，，用 1%戊巴比妥钠 1ml/100g 对大鼠进行腹腔麻醉。（3）待大鼠麻醉后将其固定于自制手术台上，取仰卧位。图 1 大鼠肝脏分叶及 Glisson 系统
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R657.3

【参考文献】

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本文编号：2542818