IL-22对肝纤维化小鼠部分肝切除后肝再生的作用

发布时间：2020-01-24 14:36

【摘要】：目的:探求一种稳定可靠的建立肝纤维化小鼠70%肝切除模型的方法,为具有基础肝病小鼠行肝切除术后相关研究提供技术支持。比较正常及肝纤维化小鼠行肝脏大范围切除后的肝再生情况,研究肝纤维化对肝切除后肝脏损伤和肝再生的影响。探讨白细胞介素-22(IL-22)对CCl_4诱导的肝纤维化小鼠行70%肝部分切除术后肝脏再生的促进作用及机制研究。方法:第一部分,66只C57/BL6小鼠随机挑选6只作为病理对照组,对比观察小鼠肝纤维化模型肝脏的病理纤维化程度,剩余60只小鼠先诱导肝纤维化,随后随机均分为传统组(单纯结扎摘除肝叶)和改良组(阻断血流后摘除肝叶)建立70%肝切除模型。每组随机挑选6只小鼠分别于肝切除术前和术后12 h,24 h,48 h,72 h 5个时间点处死小鼠,收集肝脏组织及血液标本。记录并观察术后两组的成活率,并发症的发生情况;检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平观察肝损伤;计算肝质量/体质量比值、检测细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达来观察两组肝再生差异。第二部分,120只C57/BL6小鼠随机分为对照组和实验组,每组各60只。实验组背部皮下注射40%CCl_4玉米油溶液诱导肝纤维化模型,对照组给予同等剂量的玉米油处理。6周后肝纤维化成模,两组行肝左、中叶切除。分别于术后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h和72 h处死小鼠,采集血液标本与残存肝脏组织,检测血清ALT、AST水平,肝组织病理,肝重体重比值和增殖细胞核抗原(PCNA),观察肝脏损伤及再生差异。第三部分,144只C57/BL6小鼠,随机分成PHx组(单一70%肝切除组)、CCl_4纤维化组、CCl_4+PHx组(CCl_4诱导肝纤维化后行70%肝切除组)和CCl_4+IL-22+PHx组(肝纤维化后经IL-22干预后再行70%肝切除组),各组分别于术后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h和72 h各处死6只,收集血液标本,检测血清ALT、AST及ALB水平,计算ALT/AST值,观察各组各时间点肝脏损伤情况。收集肝脏组织标本,称肝叶重量计算肝体重比,病理观察各时间点的肝脏纤维化程度和病理损伤,检测不同时间点肝脏细胞增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达数量,Western Blot检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)水平及细胞周期改变情况。结果:第一部分,(1)与对照组相比,传统组与改良组小鼠正常肝小叶结构破坏,汇管区及中央静脉周围可见大量假小叶,中央静脉周围可见炎性浸润,传统组与改良组小鼠肝纤维化模型建模成功。(2)肝部分切除术后,相比传统组,改良组小鼠的成活率显著升高(96.67%vs.73.33%),术中出血和术后腔静脉狭窄及胆漏并发症的发生率明显降低(P0.05)。(3)术后12 h和24 h传统组的ALT和AST水平高于改良组,而各组内ALT、AST均出现先增高后降低的趋势(P0.05)。(4)术后2组肝质量/体质量比值均出现增长趋势,PCNA表达数均于术后开始升高,48 h达到高峰后下降(P0.05),但2组间各时间点2指标差异均无统计学意义。第二部分,(1)与对照组相比,肝切除后,实验组各时间点ALT、AST显著升高(P0.05);(2)肝脏病理显示,实验组正常肝小叶破坏,有假小叶形成,肝细胞索排列紊乱,肝细胞出现变性坏死,损伤较重,而对照组肝小叶及细胞形态正常,损伤较轻;(3)肝体重比及PCNA检测显示,相对于对照组,实验组肝再生延迟或缓慢,PCNA阳性表达细胞数下降。第三部分,(1)术后24 h,48 h,72 h CCl_4+IL-22+PHx组小鼠血清ALT/AST值明显高于CCl_4+PHx组;术后48 h,72 h CCl_4+IL-22+PHx组小鼠血清ALB水平较CCl_4+PHx组显著升高。(P0.05)(2)术后CCl_4+IL-22+PHx组小鼠肝再生显著增快,术后24h,48h,72h CCl_4+IL-22+PHx组小鼠肝体重比(2.34±0.07,3.23±0.09,3.55±0.09)明显高于CCl_4+PHx组(2.08±0.16,2.77±0.07,2.97±0.14),且肝组织的病理损伤明显减轻。(P0.05)(3)CCl_4+PHx组术后24 h,48 h,72h PCNA阳性表达细胞数、再生肝组织内STAT3蛋白和Cyclin D1蛋白表达量明显低于其余各组,而CCl_4+IL-22+PHx组PCNA阳性表达细胞数及再生肝组织内STAT3蛋白和Cyclin D1蛋白表达量较CCl_4+PHx组明显升高。(P0.05)。结论:通过阻断肝叶血流构建肝纤维化小鼠70%肝切除模型,可显著提高模型的成功率,降低并发症的发生率;肝纤维化病变可使小鼠大范围肝切除后肝脏损伤加重,肝再生减缓;在CCl_4诱导的肝纤维化小鼠行70%肝部分切除术后,IL-22对肝脏再生起到显著的促进作用,且明显减轻肝组织病理损伤。
【图文】：

肝纤维化,肝组织,中央静脉

以细胞出现棕黄色颗粒者为阳性，计算 PCNA 阳性细胞数，察看术后两组肝细胞的增殖差异。1.1.2.6 统计学分析采用 SPSS19.0 进行统计学分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间差别比较采用 t 检验，P< 0.05 具有统计学意义。1.2 实验结果1.2.1 小鼠肝纤维化的造模情况对两组肝组织进行苦味酸天狼猩红染色（图 1）可见，两纤维化组正常肝小叶结构破坏，汇管区及中央静脉周围大量纤维组织增生形成假小叶，中央静脉周围可见炎性浸润，肝细胞索排列紊乱伴脂肪变性和坏死。而对照组，正常肝小叶结构存在，肝细胞索排列有序，肝细胞形态正常。经病理鉴定[55]，两组纤维化模型构建成功，可用于 70%肝切除。（箭头所示为三组中央静脉、汇管区纤维增生情况）对照组传统组改良组

肝组织,肝细胞,味酸,计量资料

味酸天狼猩红染色观察肝纤维化的造模情况（2）全清 ALT、AST 水平，了解小鼠肝功能变化。（3）肝察小鼠肝损伤程度。（4）6 个时间点处死小鼠，秤量肝体重比，以观察两组肝再生状况。（5）免疫组化性表达细胞数目，，观察术后两组肝细胞的增殖状态分析SS19.0 进行统计学分析。计量资料以均数±标准差（用 t 检验，P < 0.05 具有统计学意义。果纤维化模型的鉴定情况片苦味酸天狼猩红染色（图 1）可见，实验组正常肝小静脉周围纤维组织增生形成假小叶，肝细胞索排列量炎性浸润，肝细胞出现脂肪变性及坏死，而对照维增生，肝索呈放射状排列，细胞形态正常。肝纤下一步实验的研究。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R657.3

【参考文献】